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目的:探索二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对A549、HTB-182细胞凋亡的影响及其内质网应激相关机制。方法:1.体外培养A549、HTB-182细胞,分别经不同浓度(0μM、20μM、40μM、80μM、160μM、320μM)的DHA处理24h,CCK-8法检测细胞活力并计算IC50。2.体外培养A549、HTB-182细胞,各分为对照组和DHA组,DHA组用80μM的DHA处理细胞。CCK-8法检测0h、3h、6h、12h、24h、48h的细胞活力并计算抑制率。3.体外培养A549、HTB-182细胞,各分为对照组、DHA组,分别处理24h。流式细胞技术检测两种细胞的凋亡比例;Western-blot(WB)检测内质网应激上游因子BIP以及内质网应激相关性凋亡因子CHOP、JNK、p-JNK、Caspase-4的蛋白表达水平;同时,Real-time PCR(RT-PCR)检测BIP、CHOP mRNA水平;Caspase-4活性检测试剂盒检测Caspase-4的活性。结果:1.DHA浓度对细胞增殖的影响:在A549、HTB-182细胞,DHA组中20μM及40μM与对照组比较,OD值差异无统计学意义(P>0.05);80μM、160μM及320μM的DHA处理细胞后,OD值逐渐减低,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。计算出DHA处理A549、HTB-182细胞后的IC50分别为121.022μM、138.417μM,用80μM浓度的DHA进行下一步实验。2.DHA处理时间对细胞增殖的影响:在A549、HTB-182细胞,与对照组相比,经DHA处理12h、24h、48h,DHA对细胞的抑制率均升高(P<0.05),其中以24h时最高,故取24h进行下一步实验。3.各组细胞凋亡率:在A549细胞,结果显示DHA组的凋亡率(12.85±0.47)%与对照组(3.30±0.21)%比较增加(P<0.05);在HTB-182细胞,结果显示DHA组的凋亡率(9.80±0.48)%较对照组(3.55±0.12)%增加(P<0.05)。A549细胞对照组与HTB-182细胞对照组比较凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);A549细胞DHA组较HTB-182细胞DHA组凋亡率更高(P<0.05)。4.内质网相关因子的检测:在A549细胞,WB结果显示:BIP蛋白在对照组(0.36±0.06)有明显表达,DHA组(0.13±0.02)较对照组减少(P<0.05);与对照组(0.05±0.03)相比,DHA组的CHOP蛋白表达(0.53±0.14)增加(P<0.05);DHA组的Caspase-4蛋白表达(0.61±0.11)较对照组(0.07±0.02)s增加(P<0.05);DHA组的JNK蛋白表达(0.87±0.12)与对照组(0.90±0.19)比较,差异无统计学意义(P>0.05);DHA组的p-JNK蛋白表达(0.72±0.12)高于对照组(0.31±0.06)(P<0.05)。RT-PCR结果显示:BIP mRNA在对照组(1.00±0.00)中有明显表达,DHA组(0.11±0.01)较对照组减少(P<0.05);DHA组CHOP mRNA相对量(3.06±0.21)高于对照组(1.00±0.00)(P<0.05)。在HTB-182细胞,WB结果显示:BIP蛋白在对照组(0.35±0.07)中有明显表达,DHA组(0.17±0.05)较对照组减少(P<0.05);与对照组(0.14±0.03)相比,DHA组的CHOP蛋白表达(0.70±0.13)增加(P<0.05);DHA组的Caspase-4蛋白表达(0.53±0.12)较对照组(0.10±0.03)增加(P<0.05);DHA组的JNK蛋白表达(0.97±0.19)与对照组(0.98±0.18)比较,差异无统计学意义(P>0.05);DHA组的p-JNK蛋白表达(0.73±0.11)高于对照组(0.1±0.02)(P<0.05)。RT-PCR结果显示:BIP mRNA在对照组(1.00±0.00)中有明显表达,DHA组(0.37±0.02)较对照组减少(P<0.05);DHA组的CHOP mRNA相对量(2.59±0.11)高于对照组(1.00±0.00)(P<0.05)。5.Caspase-4活性检测:在A549细胞,DHA组(572.25±11.73)较对照组(35.26±2.63)明显增加(P<0.05)。在HTB-182细胞,DHA组(635.70±10.40)高于对照组(35.33±1.31)(P<0.05)。结论:DHA可诱导A549、HTB-182细胞凋亡而抑制其增殖,其机理可能是下调BIP,从而抑制未折叠蛋白反应。