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青海省是我国顶层战略部署“一带一路”和“三江源生态保护”项目中的重点区域,随着经济带和保护区的发展,人员物资的流动,蜱及蜱媒病严重威胁着人和动物的健康,研究该地区蜱种及蜱携带病原的多样性和病原基因的多态性,评估蜱传病原对生态环境和公共卫生安全影响的风险因素,为青海省及周边国家制定防控策略提供数据支撑,对深入了解我国蜱种及蜱传疫病有着深远的意义。本研究在青海省选取22个县市作为采样点,采用布旗法和人工诱捕法共采集1104只自然界游离的饥饿成蜱;通过传统形态学鉴定并结合16S rRNA、COI和ITS2基因的分子学鉴定得出有3属7种蜱,分别为青海血蜱(454/1104)、丹氏血蜱(42/1104)、西藏血蜱(2/1104)、阿坝革蜱(263/1104)、草原革蜱(246/1104)、森林革蜱(94/1104)和草原硬蜱(3/1104)。采用PCR和RLB技术对鉴定的蜱种进行无浆体(羊无浆体、边缘无浆体、牛无浆体、嗜吞噬细胞无浆体)、立克次体、伯氏疏螺旋体、梨形虫和蜱传新发病原(山羊无浆体、Colpodella spp.病原)的分子检测。PCR检测结果显示:羊无浆体的感染率为5.6%、牛无浆体为11.1%、嗜吞噬细胞无浆体为3.1%、立克次体为44.7%、伯氏疏螺旋体为5.6%、梨形虫病为22.9%、山羊无浆体为4.5%、Colpodella spp.病原为1.6%,没有检测到边缘无浆体病原。阳性样品进一步利用基因测序进行蜱传病原的种类确定,获得4种羊无浆体的MSP4基因序列;5种牛无浆体的16S rRNA基因序列;3种嗜吞噬细胞无浆体的16S rRNA基因序列;6种不同的立克次体gltA和ompA基因序列(Rickettsia sibirica subsp.sibirica BJ-90、R.raoultii、Candidatus rickettsia tibetani、Candidatus rickettsia gannanii Y27菌株和F107菌株、Rickettsia sp.10CYF);2种伯氏疏螺旋体的fla基因序列(Borrelia burgdorferi s.s、B.garinii);3种巴贝斯虫(Babesia motasi-like、B.canis、B.caballi)和5种泰勒虫(Theileria sinensis、T.uilenbergi、T.luwenshuni、T.ovis、T.annulata)的18S rRNA基因序列;2种山羊无浆体的gltA、16S rRNA和groEL基因序列;3种Colpodella spp.病原的18S rRNA基因序列。RLB方法检测结果显示:在青海地区检测到4种伯氏疏螺旋体(B.burgdorferi、B.garinii、B.afzelii、B.valaisiana)及4种混合感染类型(“B.burgdorferi+B.garinii”、“B.garinii+B.valaisiana”、“B.burgdorferi+B.garinii+B.afzelii”、“B.burgdorferi+B.garinii+B.afzelii+B.valaisiana”)。检测到6种梨形虫(B.matasi-likeLT/TZ、T.annulata、T.uilenbergi、T.luwenshuni、T.ovis、T.sinensi)及3种混合感染类型(B.matasi-like+T.luwenshuni、T.uilenbergi+T.annulata、T.uilenbergi+T.luwenshuni)。利用生物信息学软件对检测病原获得的数据进行疫病风险评估,分析得出影响疫病高发的风险因素。对青海省分布的羊无浆体MSP1a基因重复序列多态性分析,在采集的蜱体内获得34条MSP1a基因的核酸序列,鉴定出20条不同的MSP1a基因N’端的氨基酸重复类型,分析得出18种含有不同的氨基酸重复类型组合的羊无浆体菌株型。在全国12个省份24个地区采集的552份羊DNA样品中,获得44条MSP1a基因的核酸序列,鉴定出24条不同的MSP1a基因N’端的氨基酸重复类型,分析得出19种含有不同的氨基酸重复类型组合的羊无浆体菌株型。