八倍体黑果枸杞离体诱导研究

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本实验以秋水仙素为诱导剂,对四倍体黑果枸杞组培苗进行多倍体诱导,以秋水仙素浓度设置为500mg.L-1、1000mg·L-1,处理时间为6、12、24小时,通过浸泡法对四倍体黑果枸杞组培苗顶端叶片进行处理,以期获得八倍体黑果枸杞植株,并完善黑果枸杞多倍体鉴定方法,推进枸杞产业的发展。研究结果如下:1、秋水仙素浓度1000 mg·L-1处理时间12h的存活率达到半致死剂量。本实验12组处理材料中,初步筛选出2个八倍体植株,秋水仙素浓度1000 mg·L-1处理时间12h(2-2-4),秋水仙素浓度1000 mg·L-1处理时间24h(2-3-2),经染色体计数法鉴定为八倍体。2、用流式细胞仪,采用WPB解离液,以二倍体黑果枸杞分别为内标、外标测定处理材料的染色体倍性,结果与染色体计数法鉴定结论一致。且内标在流式细胞仪参数设定及分析上优于外标。3、黑果枸杞组培苗倍性增加时,叶片的气孔密度、保卫细胞长宽、保卫细胞叶绿体数差异显著。随着黑果枸杞组培苗倍性增加时,叶片的气孔密度显著减小,保卫细胞长、宽显著增大,保卫细胞叶绿体数显著增加。在黑果枸杞多倍体诱导中,可将叶片解剖结构作为初步鉴定多倍体的依据。4、不同倍性黑果枸杞较适的增殖培养基均相同,配方为:MS + ZT0.15mg·L-1 +IBA0.01 mg·L-1,不同倍性黑果枸杞在此培养基上增值倍数差异显著,分别为二倍体9.15、四倍体6.25、八倍体5.35;5、不同倍性黑果枸杞的生根率差异极显著,二倍体在IBA浓度为0-1.0mg·L-1时生根率为100%;四倍体在IBA为1.0 mg L-1时生根率最高,为45%;八倍体在1.0 mg·L-1时生根率最高,为35%。四倍体和八倍体黑果枸杞在相同生根培养基上不同批次生根率差异悬殊,生根效果不稳定,具体原因有待进一步探讨。
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