论文部分内容阅读
目的藏象学说是中医基础理论的核心,脾为后天之本,其主要的生理功能“脾主肌肉”是中医基础学科研究领域的热点。脾气健运则肌肉丰满、四肢有力;脾虚则肌肉消瘦、四肢倦怠无力,甚至痿废不用。线粒体是一种将物质及能量代谢和遗传变异三大基本生命活动形式融于一体的半自主性细胞器,有“细胞动力站”之称,可提供机体所需能量,故“脾主肌肉”理论与现代医学的线粒体功能在物质、能量代访谢方面密切相关。脾虚证是中医临床较为常见的一种证候,90年代以来,许多学者从实验、临床及脾虚证本质等多方面展开研究。本研究分为临床研究和实验研究两部分。临床研究方面进行重症肌无力(myasthenia gravis,MG)临床病历回顾性调查,在邓老“脾胃虚损,五脏相关”理论指导下,以立于脾胃,补虚益损为大法,观察健脾益气中药对该病的疗效,总结重症肌无力的诊治现状;实验研究方面采用复制脾虚大鼠动物模型,以线粒体能量代访谢为切入点,通过观察大鼠骨骼肌线粒体细胞色素氧化酶亚基COXImRNA、COXIVmRNA及蛋白表达的变化,深入探讨脾虚证能量代谢障碍机制及健脾益气方药对其影响,以期为临床用药提供指导。方法1.重症肌无力临床回顾性研究通过查阅2011年01月至2014年12月广州中医药大学第一附属医院脾胃病科重症肌无力住院电子病历,共收集脾气虚证MG(I型、IIa型、IIb型)患者149例,采用病历系统回顾方法,调查分析重症肌无力住院患者的一般临床资料(如年龄、性别、病因、诱因、病程、首发症状、中药使用情况等),用SPSS19.0行相关统计学分析,观察健脾益气方药对重症肌无力的疗效,总结重症肌无力诊治现状。2.动物实验研究选用SPF级SD大鼠42只,随机分成两组,正常组10只,模型组32只。模型组大鼠采用皮下注射利血平注射液0.5mg/kg/d,正常组大鼠皮下注射等量的生理盐水,每日1次,共8d,记录大鼠一般状况、测定尿D-木糖排泄率以判断脾虚证模型是否成功建立。当模型组大鼠出现摄食量减少、大便稀溏、明显消瘦及尿D-木糖排泄率下降等改变时,证实造模成功。采用随机数字表法随机抽取7只正常组大鼠及14只模型组大鼠,将模型组大鼠分为四君子汤组和脾虚组,每组各7只,给药组予四君子汤l0g/l0ml/kg灌胃,脾虚组和正常组予等量生理盐水灌胃,每日1次,持续3w,记录大鼠一般状况。给药3w结束后,检测尿D-木糖排泄率,采用常规HE染色观察骨骼肌及肝组织病理形态改变;提取骨骼肌线粒体,采用PCR法检测大鼠骨骼肌线粒体细胞色素氧化酶亚基COXImRNA、COXIVmRNA表达变化,免疫组化法观察大鼠骨骼肌细胞色素氧化酶亚基COXI、COXIV蛋白表达变化及四君子汤对上述指标的影响。结果1.临床回顾性研究1.1重症肌无力住院患者男女比例1:1.64;平均发病年龄为39.81 ±17.16岁;发病高峰在31～50岁之间;大部分(65.38%)患者病程在5年以下,分型以中度全身型为主(54.36%)。1.2发病诱因中以无明显诱因(79.19%)、劳累(11.41%)及感冒受凉(8.54%)为多见,表明避免劳累、预防感染、注意保暖等对于重症肌无力控制及恢复具有重要作用;首发症状中以眼(单或双)的首发症状为多见,共有100例,占67.12%;1.3重症肌无力患者的舌脉以淡舌、薄白苔、细脉最多见,反映其主要病机为脾胃虚弱;1.4中药聚类分析表明,五指毛桃、白术、甘草、黄芪、茯苓是临床上治疗MG较常用的药物,即从脾胃论治,注重补气健脾药的使用,辅以升提、祛湿、理气、补肾药,符合对重症肌无力主要病机的分析。2.动物实验研究2.1造模开始后,模型组大鼠体重显著降低(P<0.01)。停止造模后,脾虚组和四君子汤组大鼠一般状况逐渐好转、体重上升,四君子汤组大鼠体重仍显著小于正常组(P<0.01),四君子汤组大鼠体重较脾虚组有上升趋势,两组相比无统计学意义(P>0.05)。给药3周结束后,四君子汤组尿D-木糖排泄率基本恢复(P>0.05),脾虚组与正常组尿D-木糖排泄率仍具有显著性差异(P<0.01)。2.2大鼠骨骼肌的病理改变:与正常组相比,脾虚组大鼠骨骼肌纤维排列紊乱、间隙增大,肌细胞胞质染色不均匀,细胞核分布不均。与脾虚组相比,四君子汤组骨骼肌纤维排列整齐,表明四君子汤组骨骼肌病理损伤有所改善。2.3大鼠肝组织的病理改变:与正常组相比,脾虚组部分肝细胞溶解坏死,肝窦瘀血,肝索结构不清等;与脾虚组相比,四君子汤组肝索排列整齐,肝窦瘀血减少,表明四君子汤可修复脾虚时肝脏结构的损伤。2.4与正常组相比,脾虚组大鼠骨骼肌线粒体COXImRNA、COXIVmRNA表达降低(P<0.05);与脾虚组相比,四君子汤组大鼠骨骼肌线粒体COXImRNA、COXIVmRNA表达升高,具有统计学意义(P<0.05)。2.5与正常组相比,脾虚组大鼠骨骼肌COXI、COXIV蛋白表达降低(P<0.05);与脾虚组相比,四君子汤组大鼠骨骼肌COXI、COXIV蛋白表达升高,具有统计学意义(P<0.05)。结论1.重症肌无力患者的舌脉以淡舌、薄白苔、细脉最多见,中药以五指毛桃、白术、甘草、黄芪、茯苓为比较常用的药物,即从脾胃论治,注重补气健脾药的使用,辅以升提、祛湿、理气、补肾药,符合对重症肌无力主要病机的分析。2.采用利血平造模法复制脾虚证大鼠模型,通过观察大鼠一般状况、尿D-木糖排泄率,结果显示符合脾虚证动物模型的要求。脾虚证模型大鼠存在骨骼肌、肝脏病理形态损伤;经四君子汤治疗后,骨骼肌及肝脏病理损伤均有改善,表明四君子汤可修复脾虚模型大鼠的病理结构。3.脾虚证模型大鼠骨骼肌线粒体COXImRNA、COXIVmRNA及蛋白表达均降低,经健脾益气中药干预治疗后,其COXImRNA、COXIVmRNA及蛋白表达均升高,表明脾虚证时骨骼肌线粒体存在能量代谢障碍,四君子汤可明显改善细胞能量代谢。