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一、目的:
对比观察兔踝关节外侧韧带断裂解剖重建术前后机械感受器小体的数量及S1脊神经节神经元细胞表达的NT-3的变化,以探讨兔踝关节外侧韧带断裂解剖重建术对韧带本体感觉影响。
二、方法:
1、选取21只成年新西兰大白兔,随机选择3只,耳缘静脉空气栓塞处死后随机取一侧踝关节外侧韧带和同侧S1背根神经节,作为空白对照组。再随机选取9只,均在韧带中部随机切断一侧踝关节外侧韧带,行Brostr(o)m解剖重建术后缝合切口,作为实验组;余下9只,均在韧带中部随机切断一侧踝关节外侧韧带,旷置切断的韧带后,作为对照组。兔俯卧位固定于实验台上,麻醉满意后,消毒、铺无菌巾。在实验兔后肢作一长约3cm踝外侧弧形切口,找到腓骨肌腱,使其脱位后,可找到连接外踝与跟骨前部的踝外侧韧带,尖刀切断外侧韧带;实验组使用3-0丝线行端端缝合;实验对照组则将切断的韧带复位后,不缝合;复位腓骨肌腱,妥善固定后,缝合切口,并用无菌敷料包扎。术后不进行踝关节的固定,让其自由活动,普通喂养。每天肌注青霉素20万U/d,连续3d,7天后拆线。
2、分别于术后2周,6周和12周末耳缘静脉空气栓塞各处死3只实验兔,取踝关节外侧韧带,将其放入生理盐水冲洗后,按改良O'Connor and Gonzales(1979)氯化金染色法染色后,常规脱水、透明、石蜡包埋后,制备出5μm厚的连续切片,每隔200μm取一张片。光镜下对机械感受器小体(Pacini小体、Ruffini小体、Golgi腱器官)进行识别和计数。
3、沿坐骨神经逆行找到S1背根神经节,切取后其用生理盐水冲洗后,放入4%多聚甲醛内固定,再行脱水、透明、石蜡包埋。将各组背根神经节组织块连续性横切,切片厚度为5μm,每个神经节随机取切片6张。用NT-3兔抗血清(滴度为1∶100)在同一条件下对各组切片行ABC免疫组织化学染色。光镜下观察和定量。
4、所有数据均采用SPSS16.0软件统计包进行分析,连续性正态分布的资料以((-x)±s)表示,多组均数间比较采用One-Way Anova法,多组均数间的两两比较采用LCD法。P<0.05为差异有统计学意义。
三、结果:
1、在韧带机械感受器小体数计数方面,三组之间的差别有统计学差异。两两比较示:空白对照组与实验组、实验对照组各时段均有统计学差异,空白对照组多于实验组和实验对照组;实验组各时段之间与对照组一样,均无统计学差异;实验组各时段与实验对照组各时段均有统计学差异,实验组多于实验对照组。
2、在S1脊神经节神经元NT-3表达方面,三组之间的差别有统计学意义。两两比较示:空白对照组与实验组、实验对照组各时段均有统计学差异,实验组和实验对照组各时段多于空白对照组;实验组各时段之间与对照组一样,均无统计学差异;实验组各时段与实验对照组各时段之间的差别无统计学差异。
四、结论:
1、兔踝关节外侧韧带断裂后,不管手术与否,均会出现本体感觉功能下降;Brostr(o)m解剖重建术能最大限度的保留本体感受器小体,因此能最大限度的保留本体感觉功能。
2、兔踝关节外侧韧带断裂后,不管手术与否,均出现了本体感觉神经元的自我修复。