【摘 要】
:
目的:肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,同时也是预后最差的恶性肿瘤之一。非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)是其最常见的类型,尽管近年来影像学的技术发展促使肺癌早诊率得到了提升,但多数患者发现时已处于中晚期,经化疗等标准治疗方案的肺癌患者5年生存率仅为15%,临床患者的预后不佳。研究表明,去泛素链接酶家族在细胞生理功能和恶性肿瘤发展演进中发挥着重要作用,最近其
论文部分内容阅读
目的:肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,同时也是预后最差的恶性肿瘤之一。非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)是其最常见的类型,尽管近年来影像学的技术发展促使肺癌早诊率得到了提升,但多数患者发现时已处于中晚期,经化疗等标准治疗方案的肺癌患者5年生存率仅为15%,临床患者的预后不佳。研究表明,去泛素链接酶家族在细胞生理功能和恶性肿瘤发展演进中发挥着重要作用,最近其家族成员去泛素链接酶53(USP53)在多种恶性肿瘤中的抑癌作用逐渐被发现,但目前为止其深层的功能作用机制尚未被揭示。本研究拟深入探究USP53影响肺癌细胞迁移、侵袭及顺铂耐药的具体分子机制,为寻找预判化疗敏感性的生物学指标物,乃至潜在的铂类化疗辅助优化策略提供新的方向。研究方法:1.应用western blot实验检测20对肺癌及癌旁肺组织、6种肺癌细胞系中USP53蛋白表达情况;2.检测A549及其顺铂耐药细胞(A549/DDP)中USP53蛋白表达的差异;MTT检测双向调控USP53后肺癌细胞顺铂敏感性(IC50)的变化;3.应用转录组测序对比稳定干扰USP53后A549细胞的差异基因;4.在多种肺癌细胞(A549、H1299、H1975)双向调控USP53,应用3D侵袭实验、transwell、划痕实验检测对肺癌细胞迁移侵袭的影响5.A549中双向调控USP53表达,western blot检测EMT相关蛋白及ZEB1的改变;6.在A549和H1975细胞中转染USP53的同时共转染回复ZEB1的表达,划痕和transwell实验对比肺癌细胞迁移侵袭能力的变化,western blot检测EMT相关蛋白的变化;7.Co-IP实验检测ZEB1与USP53之间是否存在相互作用,并通过泛素化实验检测转染USP53对ZEB1泛素化水平的影响。结果:1.与癌旁肺组织相比,USP53在肺癌组织中显著低表达(P<0.05,*),与永生化的的人类正常支气管上皮细胞HBE相比USP53在肺癌细胞系中的表达普遍降低(P<0.05,*);2.与A549细胞相比USP53在顺铂耐受的A549/DDP细胞中表达显著降低;在A549细胞中转染USP53,细胞的顺铂敏感性明显增强(IC50降低,P<0.05,*),H1299中敲除USP53后显著降低细胞的顺铂敏感性(IC50升高,P<0.05,*);3.转录组测序对比分析稳定干扰USP53后A549细胞的差异基因,结果显示细胞骨架、细胞连接等相关通路基因发生最明显的变化4.在A549、H1975细胞中转染USP53显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05,*),而干扰USP53则显著增强A549和H1299细胞的迁移和侵袭能力;5.在A549中稳定过表达USP53后,N-Cadherin、Vimentin、ZEB1的表达降低,E-Cadherin的表达增高(P<0.05,*);稳定敲低(sh RNA)或敲除(sg RNA)USP53后N-Cadherin、Vimentin、ZEB1的表达明显增高,E-Cadherin的表达显著降低(P<0.05,*);6.在A549、H1975细胞中过表达USP53后回复性转染ZEB1,可显著恢复细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05,*),同时回复性的出现E-Cadherin表达下调和Vimentin表达的上调(P<0.01,**);7.Co-IP实验及泛素化检测结果证实USP53能够与ZEB1结合,且并增强ZEB1的泛素化水平。结论:1.在肺癌组织与肺癌细胞系中USP53的表达普遍降低,且其低表达与肺癌患者的预后不良显著相关;2.USP53可通过与ZEB1结合,增强其泛素化水平并促进其降解;3.肺癌细胞中USP53的低表达稳定并上调了ZEB1的表达,进而增强了肿瘤细胞的迁移、侵袭能力和顺铂耐受性。
其他文献
目的:砷广泛存在于自然界中,是国际公认的致癌物和环境污染物。环境砷污染是一个严重的公共卫生问题,主要与饮用砷污染的地下水有关。全球有近9400万至2.2亿人存在地下水高砷暴露的风险,其中94%人口分布在亚洲,中国有近2千万人饮用高砷水。长期环境砷暴露能引发多种疾病,而皮肤是人体的第一道保护屏障,也是对砷毒性最敏感的器官之一。大量流行病学调查显示,砷暴露可引发多种类型的皮肤损害,皮肤病变的患病率和发
目的:疟疾仍然是热带地区的重大公共卫生问题,每年可造成数百万人死亡。脑型疟疾(Cerebral malaria,CM)是与人类恶性疟原虫感染相关最严重的并发症,是造成大多数感染者死亡的原因。它的病理特征为脑微血管中疟原虫的聚集、炎性细胞因子的产生和血管渗漏,最终导致脑部水肿和缺氧。糖皮质激素(Glucocorticoid,GCs)作为临床上最常用的抗炎药和免疫抑制剂,免疫系统是糖皮质激素作用的主要
目的:稳态下肝脏巨噬细胞具有异质性,除胚胎期定居于肝脏的枯否细胞外,还有部分来源于单核细胞的巨噬细胞以及树突状细胞。此前研究发现Listr1遗传位点通过影响肝脏CD14+巨噬细胞数量控制小鼠对单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)的易感性,并且证实了Listr1遗传位点控制李斯特菌易感性不依赖于适应性免疫细胞。Listr1遗传位点对肝脏CD14+巨噬细胞数量的
北部湾由中越两国共同环抱。在两国各自管辖范围内,国家与地方政策、海洋管理机构和涉海法律条规等存在差异。两国都在推进海洋生态文明建设,但也均存在法律体系不健全、管理机构权责不清晰以及地方政府监管不力等问题。为此,两国可通过建立区域协同管理机构、合作委员会、构建统一法律制度等方式,加强北部湾海上合作,共同推进北部湾海洋生态文明建设,携手构建中越海洋命运共同体。
智慧港口是以信息物理系统为框架,通过高新技术的创新应用形成的现代化港口航运服务体系,并成为我国后期港口的建设趋势和发展方向。通过调研我国智慧港口的建设情况,发现在智慧港口建设中大数据的应用仍面临着信息安全、信息壁垒、数据权属方面的问题。因此,智慧港口建设中大数据应用可采取全面提升信息安全、促进信息互通共享、清晰明确数据权属的措施,以此提高智慧港口建设中大数据的应用效果,加快我国智慧港口的建设步伐。
目的:早期生活是个体成长发育最为关键的时期,不良的早期生活经历会对个体的认知、情绪产生终生的影响。母婴分离(maternal separation,MS)是模拟早期生活压力最常用的动物模型,在大鼠出生后的第2天(postnatal day,PND2)至第14天(PND14)每天进行母婴分离3小时(maternal separation for 180min,MS180),这是目前最常用的MS造模方
目的:微小RNA153(microRNA-153,miR-153)在创伤后应激障碍(Posttraumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠海马区表达水平升高,本研究拟探索anti-miR-153改善单程长时应激(Single-prolonged stress,SPS)大鼠行为学异常的分子机制。研究方法:实验一:(1)使用60只8-12周龄的雄性Sprague-Dawley(
目的:前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)和内侧副韧带(medial collateral ligament,MCL)在维持膝关节的静态、动态稳定性以及使人体完成各种复杂和高难度的下肢动作中起重要作用,90%的膝关节韧带损伤涉及ACL或MCL,ACL损伤是复发性膝关节不稳定的主要原因,并可能导致膝关节其他结构的继发性损伤。ACL损伤后的自愈反应极差,相反,同一
目的:PLEKHH2是含Pleckstrin同源结构域的H家族的一员,参与正常肾小球足细胞的基质粘附和皮质肌动蛋白细胞骨架的稳定,参与很多生物发育的调节过程,然而对肿瘤细胞生物学功能具有怎样的调控作用,至今仍无相关报道。最近通过RNA-seq分析发现,在非小细胞肺癌中PLEKHH2与ALK的基因融合是新的致癌突变,因此引起我们极大的兴趣去探讨,PLEKHH2在非小细胞肺癌中的功能和意义。研究方法:
目的:疟疾是经按蚊传播的寄生虫感染性疾病。疟原虫生命周期多个阶段均有运动能力,其运动能力是疟疾传播的基础。疟原虫运动是一种顶复门生物特有的滑行运动,是一种基质依赖性运动,需要滑动体提供动力。滑动体的正确组装对于原虫的运动能力有着重要作用。滑动体的核心Myo A蛋白通过酰化的滑动体相关蛋白GAP45蛋白与内膜复合体相连,GAP45蛋白与内膜复合体上的GAP40蛋白和GAP50蛋白结合。滑动体相关蛋白