c-fos和c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞保护作用的研究

来源 :第三军医大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liyizhong1235
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目的:探讨c-fos,c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞的保护作用。方法:烧伤血清按照本研究所烧伤动物模型制备获得[1] (98℃ 沸水烫伤造成30%Ⅲ°TBSA,6h后收集血清备用),采用含1%氧气的混和气体作为缺氧模型[2],按照分子克隆方法构建c-fos,c-jun反义基因重组体,用构建好的c-fos,c-jun反义基因重组体转染体外培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞,然后加入烧伤血清培养,并且造成缺氧,采用光镜,电镜观察心肌细胞的形态学改变,用RT-PCR方法研究c-fos,c-jun mRNA在心肌细胞中的表达变化,用Western blot方法检测心肌细胞c-fos,c-jun蛋白,肌钙蛋白,细胞骨架β-微管蛋白(β-Tubulin β-Tub)的表达变化。结果:加入烧伤血清并造成缺氧的非转染心肌细胞(下文称非转染组),光镜下细胞形态明显改变,出现细胞骨架网状结构紊乱,有的细胞骨架甚至全部断裂,呈颗粒状,散布在核周围; 电镜下细胞微管结构有明显的溶解和断裂。但转染了反义基因重组体(下文称转染组)后,光镜下心肌细胞胞浆丝与丝之间互相连接呈网状,由核向周边放射状分布,完整清晰; 电镜下微管结构基本保持完好,偶见断裂和溶解现象。RT-PCR结果显示,非转染组心肌细胞c-fos、c-jun mRNA表达显著增加。但当转染了反义基因重组体后,c-fos,c-jun mRNA表达较非转染组显著减少。Western blot结果显示,转染组心肌细胞c-fos,c-jun蛋白表达较非转染组心肌细胞显著降低,但β-Tubulin和肌钙蛋白表达水平却显著升高。结论:缺氧复合烧伤血清处理可诱导心肌细胞c-fos,c-jun表达显著增加,心功能重要指标β-Tubulin和肌钙蛋白的表达明显下降,造成心肌细胞损伤,转染c-fos,c-jun反义基因重组体后,c-fos,c-jun表达显著下降,β-Tubulin和肌钙蛋白的表达明显回升,心肌细胞形态结构损伤明显减轻,表明c-fos,c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞具有保护作用。
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