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茯苓是多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf.的干燥菌核,为利水渗湿之主药。多糖是茯苓中主要成分之一。 本论文将茯苓粉末在60℃条件下采用温水浸提、醇沉、透析和冷冻干燥获得总多糖(Poria cocos polysaccharides,PCP),提取率为0.25%,糖含量为58.05%,由岩藻糖(Fuc)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)组成,单糖摩尔比分别为Fuc:Man:Glc:Gal=1.00:1.96:0.95:4.94。PCP能显著提高卵白蛋白(OVA)免疫小鼠的特异性抗体滴度。本论文分别用H1N1流感疫苗和乙型肝炎疫苗抗原(HBsAg)追踪总多糖中具有疫苗佐剂活性的多糖成分,并进行其理化性质和结构表征的研究。 首先,茯苓总多糖PCP经DEAE-Cellulose柱层析分离获得二个组分PCP-A和PCP-B,得率分别为30.4%和33.7%。PCP-A为峰高分子量为2.82×104 Da的一个非对称峰,PCP-B含有二个含糖峰,其中一个峰高分子量以2.86×104 Da为主,同时还有一个分子量超过5.0×105 Da的低色谱峰。PCP-A和PCP-B均由岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其中PCP-A的单糖摩尔比为Fuc:Man:Glc:Gal=1.00:1.82:0.37:5.67,PCP-B的单糖摩尔比为Fuc:Man:Glc:Gal=1.00:1.86:4.46:7.20。 PCP-A采用Sephadex G-100柱层析纯化获得分子量均一多糖PCP-Ⅰ。PCP-B同样经过Sephadex G-100柱层析分离和纯化获得分子量均一多糖PCP-Ⅱ。PCP-Ⅰ的峰高分子量为2.79×104 Da,PCP-Ⅱ的峰高分子量为2.90×104 Da。PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ也均由岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖四种单糖组成,其中PCP-Ⅰ的单糖摩尔比为Fuc:Man:Glc:Gal=1.00:1.81:0.27:7.27,PCP-Ⅱ的单糖摩尔比为Fuc:Man:Glc:Gal=1.00:1.63:0.16:6.29。 PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ通过高碘酸氧化、Smith降解、甲基化反应,并结合IR、NMR、GC、GC-MS分析,推测其结构特征如下: (1)PCP-Ⅰ含有α和β构型,半乳糖为主要骨架单糖,其主要连接方式有(1→6)、(1→2,6)、(1→2,4)和末端片段四种主要连接方式及少量(1→3,6)片段;岩藻糖主要有(1→3)和末端片段;甘露糖主要有(1→2)和少量的(1→2,6)片段。 (2)PCP-Ⅱ中的单糖连接方式与PCP-I有相似性,但与PCP-Ⅰ不同之处在于还存在Gal(1→2,4,6)。 本论文首次采用60℃温浸提取具有疫苗佐剂活性的茯苓总多糖,继而对其进行分离和纯化,获得二个分子量均一的活性多糖成分,并对其进行了理化性质和结构特征的研究。该论文的研究将为茯苓多糖作为疫苗佐剂的开发奠定坚实的实验基础。