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目的:探讨IRX5通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌EMT的作用机制。方法:(1)采用Western blot检测3对肝癌组织标本中IRX5、β-catenin、E-cadherin的表达水平;运用ELISA检测100例肝癌患者血清和50例对照组血清中IRX5、β-catenin的表达水平,采用Spearman方法分析肝癌中IRX5、β-catenin的相关性。(2)选取Hep G2、SMMC7721肝癌细胞系作为研究对象,每株细胞分为两组:对照组(sh-NC)、敲低组(sh-IRX5),采用瞬时转染的方法敲低IRX5构建细胞模型,运用RT-q PCR和Western blot验证IRX5的敲低水平;运用光学显微镜观察细胞的形态变化;运用划痕实验评价IRX5对肝癌细胞迁移的影响;通过Western blot方法检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白(β-catenin、phospho-β-catenin、GSK-3β、phospho-GSK-3β)、Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因(MMP2、MMP9、c-MYC、Cyclin D1)和EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Twist1)的表达水平。(3)采用慢病毒包装构建IRX5敲低稳转肝癌细胞株,运用RT-q PCR验证IRX5的敲低水平。以上述细胞为研究对象,分为对照组(sh-IRX5+pc DNA3.1)、挽救组(sh-IRX5_+pc DNA3.1-IRX5),采用Western blot检测IRX5的表达水平;采用划痕实验验证IRX5对肝癌细胞迁移的影响;运用Western blot方法检Wnt/β-catenin信号通路蛋白(β-catenin、phospho-β-catenin)、Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因(MMP2、MMP9)和EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Twist1)的表达水平。(4)将构建的稳转细胞株注射到裸鼠皮下,检测裸鼠皮下成瘤的瘤子的体积与重量,运用免疫组化检测裸鼠皮下成瘤组织中IRX5、β-catenin、phospho-β-catenin的表达水平。结果:(1)与癌旁组织相比,肝癌组织中IRX5、β-catenin的表达水平明显增高,E-cadherin的表达水平降低;与对照组相比,肝癌患者血清中的IRX5、β-catenin的表达水平明显增高(P<0.01),且IRX5与β-catenin的表达呈正相关(r=0.8997,P<0.01)。(2)RT-q PCR检测在Hep G2、SMMC7721细胞中IRX5 m RNA表达水平分别为0.43±0.06、0.46±0.05(P<0.01),Western blot检测IRX5蛋白表达水平明显降低;敲低IRX5后,肝癌细胞形态较多表现为上皮形态;且敲低IRX5后肝癌细胞的迁移能力明显降低(P<0.01);Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin及下游靶基因蛋白(MMP2、MMP9、c-MYC、Cyclin D1)和EMT相关蛋白(N-cadherin、Vimentin、Snail、Twist1)表达均降低,phospho-β-catenin、E-cadherin表达增高(P<0.01),GSK-3β、phospho-GSK-3β表达无明显改变(P>0.05)。(3)采用RT-q PCR检测肝癌稳转细胞株中IRX5 m RNA的表达明显降低(P<0.01),在稳转敲低的IRX5细胞株中过表达IRX5,Western blot检测IRX5表达明显增高。与对照组相比,挽救组划痕迁移能力明显增强(P<0.01);Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin和下游靶基因(MMP2、MMP9)和EMT相关蛋白(N-cadherin、Twist1)表达均增高,phospho-β-catenin、E-cadherin表达均降低(P<0.01)。(4)与对照组相比,敲低IRX5组裸鼠成瘤的瘤子体积与重量明显较低;敲低IRX5裸鼠成瘤组织中IRX5、β-catenin的表达明显降低且phospho-β-catenin的表达明显增高。结论:转录因子IRX5可以激活Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌的EMT的发生,从而有利于肝癌细胞的侵袭与转移。