【摘 要】
：
目的 苯并（a）芘（BaP）是广泛存在的环境污染物,在环境、食品、饮用水中都能被检出,具有致癌、致畸、致突变的“三致”作用,其生殖毒性也逐渐成为研究的热点。然而BaP及其代谢活化产物对女性滋养层细胞及流产的影响的研究非常少,本研究旨在揭示BaP的代谢产物BPDE诱导的女性滋养层细胞功能障碍与流产发生之间的关系及其潜在的分子机制,寻找并鉴定新lnc RNA及其调控的信号通路,探讨lnc RNA对BP
论文部分内容阅读
目的 苯并（a）芘（BaP）是广泛存在的环境污染物,在环境、食品、饮用水中都能被检出,具有致癌、致畸、致突变的“三致”作用,其生殖毒性也逐渐成为研究的热点。然而BaP及其代谢活化产物对女性滋养层细胞及流产的影响的研究非常少,本研究旨在揭示BaP的代谢产物BPDE诱导的女性滋养层细胞功能障碍与流产发生之间的关系及其潜在的分子机制,寻找并鉴定新lnc RNA及其调控的信号通路,探讨lnc RNA对BPDE诱发流产这一过程的调控作用,揭示环境中多环芳烃诱导女性滋养层细胞功能障碍而引发流产的调控机制,以期为流产的预防和治疗提供科学依据。方法 第一部分新LncRNA的发现及功能鉴定（1）采用高通量测序技术检测BPDE暴露的滋养层细胞中转录组变化,筛选差异表达的LncRNA;（2）采用RACE实验验证Lnc-HZ09的全长,FISH实验对Lnc-HZ09进行亚细胞定位;（3）采用Trans-well实验检测敲低或过表达lnc-HZ09、PLD1及Hu R后的滋养层细胞的侵袭迁移能力;第二部分BPDE通过lnc-HZ09削弱滋养层细胞侵袭迁移的机制研究（1）采用RT-q PCR实验和Western blot实验检测HZ09的表达和通路相关基因表达量的变化;（2）采用RIP实验、Me RIP实验和RNA pull-down实验,检测lnc-HZ09、PLD1与Hu R的相互作用,HZ09的甲基化修饰;（3）采用Ch IP实验检测PLD1启动子区域与转录因子SP1,HZ09启动子区域与转录因子MSX1的结合;（4）对RM组织,采用RT-q PCR实验和Western blot实验检测lnc-HZ09的表达和通路相关基因表达量的变化。采用Ch IP实验、Me RIP实验检测转录因子与启动子区的结合,m6A甲基化修饰;（5）对BPDE暴露的滋养层细胞,采用Trans-well实验、检测滋养层细胞的迁移侵袭能力,采用RT-q PCR实验和Western blot实验检测lnc-HZ09的表达和通路相关基因表达量的变化;采用Ch IP实验、Me RIP实验检测转录因子与启动子区的结合,m6A甲基化修饰;第三部分动物模型的构建采用0、0.05、0.2 mg/kg的BaP分别灌胃构建小鼠流产模型,对流产小鼠胎盘采用RT-q PCR实验和Western blot实验检测相关通路基因表达量的变化。结果 第一部分新LncRNA的发现及功能鉴定高通量测序结合RT-q PCR实验筛选出BPDE暴露后差异高表达的新lnc-HZ09,其不具有编码性,长度为366nt,在细胞质和细胞核内均有分布,且主要分布于细胞质;HZ09能明显抑制滋养层细胞的侵袭迁移能力。第二部分BPDE通过HZ09削弱滋养层细胞侵袭迁移的机制研究在滋养层细胞中,PLD1能够促进下游基因RAC1和CDC42的表达从而促进细胞的侵袭迁移,与HC组相比,RM组织中PLD1、RAC1和CDC42的表达量相对较低,而lnc-HZ09的表达量相对较高;SP1作为PLD1的转录因子能够启动PLD1的转录,RNA结合蛋白Hu R可与PLD1的m RNA结合以维持稳定性,而lnc-HZ09可抑制SP1的表达,并与PLD1的m RNA竞争结合Hu R;MSX1作为lnc-HZ09的转录因子可启动lnc-HZ09的转录,在lnc-HZ09上存在m6A RNA甲基化修饰位点,甲基化转移酶METTL3可促进lnc-HZ09 m6A甲基化修饰使其稳定性提高;在BPDE中,lnc-HZ09对PLD1的调控具有与正常细胞相同的机制,且BPDE能够促进MSX1和METTL3的表达,增加lnc-HZ09的稳定性,降低PLD1 m RNA的稳定性;与HC组相比,RM组织中SP1的表达量偏低,而MSX1和METTL3的表达量相对较高,且lnc-HZ09的表达量与PLD1、RAC1和CDC42的表达量具有明显的负相关。第三部分动物模型的构建lnc-HZ09在小鼠组织中不具有同源性;SP1、PLD1、RAC1和CDC42在小鼠中均具有同源性,且与对照组相比,在BaP灌胃后流产的小鼠胎盘组织中表达量明显偏低。结论 在滋养层细胞中,本研究鉴定出一条新的LncRNA-HZ09,BPDE能够通过促进MSX1的表达及HZ09的m6A甲基化修饰,使HZ09的表达量异常增加,在lncHZ09的表达量增加后,SP1的表达量和PLD1 m RNA稳定性明显降低,致使PLD1的转录减少,且降解增加,表达水平也因此明显降低,最终削弱滋养层细胞的侵袭迁移能力,这可能与流产的发生密切相关。
其他文献
云计算是一种新型的商业计算模型。它将各种硬件设施虚拟化,采用一种按使用量计费的形式向使用者提供高效的可拓展的计算服务。随着生产力的不断提高,科学研究和生产活动需要有非常强大的计算能力来分析和计算数据量,各个行业、领域或单一组织的IT架构难以实现所需的计算要求。而云计算的优势在于无需自己购买IT基础设施、搭建私有计算平台以及管理升级软硬件资源而投入高昂的费用和人力成本。云工作流顾名思义为将云工作有关
研究目的:通过观察老年2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM）患者胆红素与骨质疏松（osteoporosis,OP）的相关性,以探讨胆红素水平对糖尿病合并OP的影响。方法:回顾性调查2020年1月至2020年12月于我中心住院的老年T2DM患者537名,平均年龄为66.0±6.9岁,根据患者骨密度（Bone mineral density,BMD）测定值（T值）分为
新的课程改革的标准中提到,教师应当对学生的核心素质进行培养。在小学数学这门科目中,数学的核心素养就是运算能力的培养。为更好地提升小学阶段学生的运算能力和逻辑思维能力,以此为数学的运算能力打下基础,帮助学生在以后的学习生活中实现可持续发展。本文以新课改中的核心素养的培养为背景,对当前教师培养学生的运算能力的现状进行阐述。从实践角度探究教师在培养学生数学核心素养时的可行策略。
目的:通过检测血清、尿液肌醇水平,结合代谢组学方法筛选差异代谢物,探讨肌醇失衡与PCOS之间的关系,并进一步分析肌醇失衡与高雄激素血症、胰岛素抵抗、脂代谢之间的关系,以期肌醇水平作为PCOS的预测价值,同时为肌醇治疗PCOS提供理论依据。方法:1.收集于2018年9月至2020年12月之间就诊福建省妇幼保健院妇科门诊的PCOS患者,共计278个,并从同期非PCOS患者中随机选择了93名作为对照组。
目的产后出血（Postpartum haemorrhage,PPH）是目前全球孕产妇死亡最常见的原因之一,占产妇死因构成比30%。WHO最近一项全球多中心流行病学调查发现产后出血在低收入和中等收入国家发病率较高,发病率达1.2%,这些PPH患者中,导致严重临床结局占18%,病死率为3%。重症PPH患者需要接受大量输血风险较高。输血是ICU中纠正凝血功能紊乱和维持有效循环容量的重要干预手段,但对该类
目的:减重是多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）治疗策略中重要的一环,与传统的生活方式管理及药物治疗相比,减重手术有显著且持久的减重效果。本研究通过Meta分析来评估减重手术对多囊卵巢综合征治疗疗效。方法:检索Pub Med、Cochrane Library、Embase和CNKI数据库。检索时间是从各数据库建库开始,至2020年6月截止。收集伴有肥胖
随着互联网应用的不断深入与发展,无线网络范围的不断扩大,我们需对无线网络进行有效管理。由于WIFI网络由成千上万个不同品牌的AP（Wireless Access Point,无线接入点）组成,为了不间断地了解网络平台的运行状态,需要建设一个用于多品牌融合的监控系统,以便有效地发现网络故障,同时通知管理员及时处理故障。虽然无线设备制造商也会为其提供一个支持本品牌网络产品的管理平台,但是面对多品牌WI
目的:肥胖是严重的医学及社会问题,严重干扰着人们的生活和工作,甚至会导致一系列的并发症,给家庭和社会带来了沉重的负担。虽然已有大量的文献表明睡眠障碍能促进肥胖,但调节睡眠-觉醒行为和进食行为以及其相互作用关系的神经机制至今尚不明确。本项目应用新式的化学遗传学技术,特异调控星形胶质细胞的活性,通过脑电/肌电记录、电生理、钙成像等技术,阐明外侧下丘脑星形胶质细胞通过γ-氨基丁酸能神经元对睡眠-觉醒行为
目的探讨妊娠期大鼠母体镉暴露后对F2、F3代成年雌鼠卵巢颗粒细胞雌孕激素的影响的母系遗传跨代效应,以期为进一步探索镉对子代雌性生殖毒性效应及相关生物学机制研究提供资料和依据。方法按一个对照组（生理盐水）和三个染镉剂量组（分别为Cd Cl20.5 mg/kg、Cd Cl22.0 mg/kg、Cd Cl28.0mg/kg）在妊娠期GD1-GD20每日一次采用等体积灌胃染毒,得F1子代。F1代雌鼠常规饲
目的探讨卵泡液金属元素与卵巢储备功能减退发病之间的关联,并进一步通过细胞实验及动物实验探究砷暴露对卵巢类固醇激素合成的影响及其机制。方法第一部分卵泡液金属元素与DOR的关联性研究采用以医院为基础的病例-对照研究,收集2019年1月至2020年12月在我校附属省妇幼保健院行辅助生殖技术的DOR患者及对照组的临床基础数据和卵泡液。ICP-MS检测卵泡液中21种金属元素含量;主成分分析用于观察一般聚类趋