论文部分内容阅读
目的：检测恩度(rh-endostatin)对不同生长状态的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein entheiail cell，HUVEC)的抑制作用，以及对其表面分子标志物的影响，研究二者的内在联系并深入研究恩度的作用机制。方法：1、制备三种生长状态的HUVEC细胞。应用流式细胞术分别检测刚贴壁细胞、对数生长期细胞及经不同浓度TNF-α激活的HUVEC细胞的分子表面标志物CD146、CD105、CD62E的变化情况。2、检测恩度作用于不同生长状态的内皮细胞后的标记物变化情况。应用流式细胞术检测恩度作用于刚贴壁细胞、对数生长期细胞及经不同浓度TNF-α作用的HUVEC细胞的分子表面标志物CD105、CD146、CD62E的变化情况。3、应用SPSS11.5软件对数据进行单因素方差分析，探讨各表面标记物与细胞生长的不同状态、及其经恩度作用后的变化与其不同作用浓度和时间的关系。结果：恩度作用前HUVEC表面分子标志物的检测结果：(1)刚贴壁HUVEC细胞：CD105随贴壁时间延长而增加，经单因素方差分析，有统计学意义(P＜0.05)；CD62E不随贴壁时间变化(P＞0.05)。(2)对数生长期HUVEC细胞：CD146、CD105呈持续稳定地高表达，CD62E呈低表达。(3)经不同浓度TNF-α作用的HUVEC细胞：CD146仍呈持续的高表达，与对数生长期的比较，无显著性差异(P＞0.05)；CD105在6h内随浓度增加下调，单因素方差分析，有统计学意义(P＜0.05)，经过24h又回调至对数生长期时的高水平；CD62E6h内随浓度增加渐升高，在250IU／ml处达峰值，单因素方差分析，有统计学意义(P＜0.05)，经过24h又回调至对数生长期时的低水平。恩度作用后HUVEC表面分子标志物的检测结果：(1)CD105的变化：刚贴壁HUVEC细胞、对数生长期细胞、经TNF-α250IU／ml作用6h后细胞其表达均随恩度的作用浓度及时间变化，经单因素方差分析，有统计学意义(P＜0.05)。(2)CD62E的变化：只在经TNF-α250IU／ml作用6h后细胞组在恩度作用24h时间段内随恩度浓度增加下调，单因素方差分析，有统计学意义(P＜0.05)，其余各组均无显著性差异(P＞0.05)。结论：1、CD146是所有血管内皮细胞所具有的共同标记、可能分别表达在“静止”和“活化”两种内皮细胞表面，高浓度的TNF“激活作用”也不能使其发生明显变化。2、CD105在仅经生理浓度的血清因子刺激后即可明显上调、表达于具有增殖及粘附功能的内皮细胞表面，可能至少反映了活化状态中的增殖及粘附能力，对外界刺激反应敏感、变化快，可能是反映内皮细胞活化状态的早期标记。3、CD62E只表达经高于生理浓度的TNF激活的内皮细胞表面、可能至少反映了活化状态中的粘附、迁移能力，且仅对外界高浓度刺激因子产生应答、变化较慢，可能是反映内皮细胞活化状态的晚期标记。4、一定浓度的内皮抑素可能不足以诱导内皮细胞凋亡，却可以明显抑制其活化、使其转入“静止状态”，其活化标记物也随之下调。CD105和CD62E可以作为反映其抑制活化作用的理想标记物。