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目的1.探求半夏泻心汤的来源、组方法则、组方思想,寻求半夏泻心汤优化的配伍结构,从而提高临床疗效。2.建立健康人唾液中黄芩苷含量测定的间接竞争ELISA方法,并对该方法的适用性进行考察,为半夏泻心汤在人体唾液中的药物浓度分析及药代动力学研究提供基础。3.研究半夏泻心汤中苦、甘药味黄芩和人参的代表性成分黄芩苷和人参皂苷Re在健康志愿者唾液中的药代动力学特征,测量口服半夏泻心汤(胶囊)后不同时间唾液中黄芩苷和人参皂苷Re的浓度动态变化,为采用唾液进行临床人体药代动力学以及复方药物配伍研究奠定基础。方法1.应用发生学的研究方法,结合医学、哲学、文献学的相关知识,考镜源流、探微索颐,从半夏泻心汤的起源出发,对半夏泻心汤中蕴含的组方思想进行认识还原。2.建立健康志愿者唾液中黄芩苷含量测定的间接竞争ELISA方法,制备标准曲线,考察所建立方法的线性范围、最低检测限、灵敏度、相对回收率、精密度与准确性和稳定性。3.招募14名健康志愿者,随机分为2组,8人为口服黄芩胶囊组,6人为口服半夏泻心汤(胶囊)组,各受试者于服药前30min收集空白唾液,服药后30、45、60、120、180、240、300、315、330、360、420、540、660和720min收集唾液。唾液样品处理后,采用间接竞争ELISA方法检测唾液样品中黄芩苷和人参皂苷Re的浓度。分别以黄芩苷浓度和人参皂苷Re浓度为横坐标(X轴),在450nm处的吸光度为纵坐标(Y轴),绘制标准曲线。采用Kinetica version 5.0求药动学参数,以SPSS20.0统计软件处理分析数据。数据以x±S表示。结果1.半夏泻心汤来源于《汤液经法》泻心汤(载于《辅行诀五脏用药法要》,以下简称《辅行诀》)。半夏泻心汤由《汤液经法》泻心汤加半夏和大枣而来,其主治病症与《汤液经法》泻心汤基本相同。《汤液经法》已经亡佚,我们由《辅行诀》而得以窥其一斑。《辅行诀》与《伤寒杂病论》同源而异流,《伤寒杂病论》是一部治疗专书,罕言组方原则,而多言症状与方剂,《辅行诀》以阐述方剂的组成、主治为主,并以“五味补泻体用图”为全书组方的核心法则,使研究者有法可循。2.黄芩苷在健康人唾液中的线性范围为30ng/ml-1000ng/ml,线性回归方程为y=-0.2561n(x)+1.9224,R2=0.9958。灵敏度(50%抑制时的浓度)为228ng/mL.最低检测限为11.71ng/mL.日内精密度和日间精密度的RSD值均小于15%,平均回收率范围在95%-115%之内,长期冷冻存贮对黄芩苷的稳定性有影响。3.服用黄芩胶囊后,黄芩苷在健康志愿者唾液中的药代动力学参数为：Cmax=271.75 ±167.24 ng/mL,Tmaxl=40±17.32min,Tmax2=342±26.83min,AUCO-t=68763.15± 58914.55 ng/mL.min,MRT=578.2±340.4min.健康志愿者口服黄芩胶囊后,黄芩苷唾液浓度-时间曲线出现双峰现象,第一次达峰时间大约在30～60min左右,第二次达峰时间大约在330～360min左右,在同一时间点的健康志愿者唾液中的黄芩苷含量存在个体差异。4.服用半夏泻心汤(胶囊)后,黄芩苷在健康志愿者唾液中的药代动力学参数为：Cmax=1057.41±801.88ng/mL, Tmaxl=35±8.66min, Tmax2=320±17.32min, AUC0-t=303955.3±259071.5ng/mL·min, MRT=976.24±515.61min.黄芩苷唾液浓度-时间曲线出现双峰现象,第一次达峰时间大约在35min左右,第二次达峰时间大约在330min左右。人参皂苷Re在健康志愿者中的药代动力学参数为：Cmax=146.75± 261.16ng/mL,Tmax=336±48.14min,AUCO-t=30858.26±46828.19ng/mL·min, MRT=556.67±158.90min.人参皂苷浓度时间曲线呈单峰,达峰时间大约在330min左右。结论1.《辅行诀》五味补泻组方法则与《内经》六气淫胜理论和五脏苦欲补泻理论有关。《辅行诀》五味五行配属秉承《脏气法时论》思想,是以药味之功用所应四时之气来进行五味五行配属划分的。《辅行诀》载泻心汤实为泻“土”而设,这与早期的五脏五行配属中心属“土”有关。苦甘配伍在《辅行诀》载泻心汤中起到重要作用,是泻“土”的核心药物组合。由此可知,半夏泻心汤实为泻“土”而设,其成方乃张仲景取方《汤液》,药味之增减本《本经》,结合自己的临床实践,加减化裁而成,其组方思想受到西汉时期药物性味理论的影响,与《内经》五脏苦欲补泻理论密切相关,其配伍法则与汉以前“以味成方”的组方思想有关。苦甘配伍是半夏泻心汤配伍的核心。2.本研究首次建立了黄芩苷在健康志愿者唾液中的间接竞争ELISA方法,通过方法学考察,标准曲线线性范围良好,灵敏度高,精密度与准确性、相对回收率均符合人体生物样品的检测标准。间接竞争ELISA方法适用于人体唾液样品中黄芩苷微量成分的含量检测,为中药活性成分的药物浓度分析及药动学研究提供新的方法。3.黄芩胶囊组和半夏泻心汤组唾液中的黄芩苷浓度-时间曲线以及达峰时间基本一致,半夏泻心汤组唾液中人参皂苷Re的浓度-时间曲线与文献报道的人口服人参颗粒后唾液中人参皂苷Re代谢曲线不同,出峰时间与黄芩苷的第二峰出峰时间无显著差异(P>0.05)。说明经过配伍后人参皂苷Re的药代动力学特征发生改变,且这一改变可能与黄芩相关。