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目的:研究丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)在体外对Jurkat细胞及U266细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响;观察VPA对组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及组蛋白乙酰化修饰调控的影响,初步探讨白血病及骨髓瘤的发生、发展与表观遗传学之间的联系,从而进一步阐明白血病及骨髓瘤发生、发展的可能机制。观察VPA对Jurkat细胞及U266细胞的促凋亡作用及调节相关基因的转录水平,并探讨促凋亡的可能途径。另外进一步研究VPA对原代细胞的增殖抑制作用及调控组蛋白乙酰化修饰,进而诱导相关基因的重新表达。方法:采用CCK-8法检测VPA对Jurkat细胞及U266细胞增殖的抑制作用;光镜下观察细胞增殖及克隆抑制情况;Hoechst 33258荧光染色,DNA凝胶电泳观察细胞凋亡情况;应用流式细胞仪检测VPA作用前后Jurkat细胞及U266细胞周期及细胞凋亡的变化情况;半定量RT-PCR检测VPA作用前后Jurkat细胞及U266细胞中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、p21waf1/cip1、p27kip1、c-myc、survivin mRNA的表达变化;Western blot方法检测VPA作用前后HDAC1、组蛋白H3、H4乙酰化水平及caspase-3、caspase-9蛋白的表达情况。同样应用CCK-8法检测VPA对原代细胞增殖的抑制作用,用RT-PCR法检测VPA作用前后原代细胞HDAC1、p21waf1/cip1、p27kip1、c-myc、survivin mRNA表达的变化,用Western blot方法检测VPA作用前后原代细胞HDAC1、组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化。结果:(1)VPA对Jurkat细胞及U266细胞的增殖抑制作用呈时间-浓度依赖性;光镜下观察可见药物作用后细胞增殖受抑制及克隆形成抑制。(2)VPA处理Jurkat细胞及U266细胞48h后,细胞周期检测显示G0/G1期比例增高,S期比例下降,细胞被阻滞在G0/G1期。(3)与未处理组相比,VPA作用Jurkat细胞及U266细胞48h后HDAC1基因mRNA和蛋白水平表达减弱,而组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平表达增加。(4)与未处理组相比,VPA作用Jurkat细胞及U266细胞48h后Hoechst 33258荧光染色可见细胞凋亡增加,细胞核致密浓染;DNA凝胶电泳可见典型的DNA梯形条带;流式细胞仪检测细胞凋亡率增加。(5)与未处理组相比,VPA作用Jurkat细胞及U266细胞48h后p21waf1/cip1、p27kip1 mRNA的表达增强,而c-myc、survivin mRNA的表达减弱,procaspase-3、procaspase-9蛋白表达也降低。(6)VPA作用原代ALL细胞后,可见细胞增殖生长受抑制,呈时间-浓度依赖性;VPA作用48h后HDAC1基因mRNA和蛋白水平表达减弱,而组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平表达增加;p21waf1/cip1、p27kip1 mRNA的表达增强,而c-myc、survivin mRNA的表达减弱。结论:(1)VPA在体外能够抑制Jurkat细胞及U266细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,促进细胞凋亡,并调节相关基因表达,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关。(2)VPA在体外能够抑制原代ALL细胞增殖,下调HDAC1的表达,提高组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平,调节相关基因的表达。这为今后VPA在治疗白血病方面提供一定的理论基础。