【摘 要】
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研究首先对该室保藏的一株透明质酸生产菌GXH-1进行生理生化特性鉴定,结果发现细胞干重和HA得率的最佳pH值、培养温度、培养时间分别是pH=6.5、37℃、48hr.克隆了GXH-1的16Sr
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研究首先对该室保藏的一株透明质酸生产菌GXH-1进行生理生化特性鉴定,结果发现细胞干重和HA得率的最佳pH值、培养温度、培养时间分别是pH=6.5、37℃、48hr.克隆了GXH-1的16SrDNA并测序,经在Gene-Bank中进行Blast分析,结果是该序列与Streptococcus equi subsp zooepidemicus的16SrDNA同源性达到100％(gi | 28849227 |dbj | AB104843).根据透明质酸分解酶的同源性分析,在Streptococcus equi的全序列里分析出一个约2.6Kb的ORF,这个ORF可能是透明质酸分解酶的序列.根据此ORF的序列,设计出一对引物,以GXH-1的总DNA为模板,PCR扩增了一个约2.6kb的开放阅读框.测序的结果是此ORF与Gene-Bank中已公布的Streptococcus equi的2.6Kb的ORF的氨基酸同源性达99%.将此ORF连接入质粒pSE-380中,并在大肠杆菌JM109和BL21中表达.SDS-PAGE分析表明:有分子量约为97.5kD的目标条带,在BL21中表达强于在JM109的表达.采用了Morgan-Elson反应做了透明质酸分解酶活力测定,检测到透明质酸分解酶活力.该研究还构建了透明质酸分解酶基因的置换型同源重组质粒pGEM-3Zf(+)-hy/-amp,期望利用hyl-amp双链片断实现与菌株染色体上的基因同源重组,获得透明质酸分解酶缺失的突变子.
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