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真菌多糖作为一类天然高分子化合物,具有免疫调节、抗肿瘤、降血脂、抗辐射、抗溃疡、抗衰老、抗氧化、抗病毒、降血糖、抗突变等复杂多样的生物活性。因其具有上述多种生物活性现已在医药、保健等行业受到广泛关注,国内外不少科研工作者对许多种类的真菌多糖也做了大量相关研究工作,为天然真菌的开发和利用提供了大量理论资料。松茸作为天然真菌具有极高的营养价值和药用价值,其所含成分具有抗肿瘤、免疫调节等生物活性,而其所含多糖成分尤为突出。虽然对松茸及其多糖的研究有不少文献报道,但大多集中在松茸多糖的提取分离纯化,粗提取物的生物活性的研究,而松茸多糖的纯提取物的结构鉴定及其免疫调节,抗肿瘤等生物活性的研究相对较少。本研究于实验前期从松茸子实体里提取分离纯化获得松茸多糖单体(TMP-A),并对其进行了体外免疫调节活性研究。本研究采用CCK-8法检测TMP-A对免疫细胞(Raji细胞、Jurkat细胞、RAW264.7细胞)的增殖效应;碘化丙啶染色流式细胞术检测TMP-A对RAW264.7细胞周期的影响;中性红法检测TMP-A对RAW264.7细胞吞噬能力的影响;经典的Griess Reagent法检测TMP-A对RAW264.7细胞释NO水平的影响;ELISA法检测TMP-A对RAW264.7细胞的细胞因子(TNF-α、IL-6)释放量的影响;实时荧光定量PCR法检测TMP-A对RAW264.7细胞内细胞因子基因(TNF-α、IL-6、IL-1β)及iNOS基因的mRNA相对表达的影响;Western Blot法检测TMP-A对RAW264.7细胞内iNOS及其COX-2蛋白表达的影响。实验结果表明:TMP-A在一定浓度范围内能显著促进免疫细胞(Raji细胞、Jurkat细胞、RAW264.7细胞)的增殖,细胞周期实验结果表明:TMP-A能够促使处于S期、G2/M期的RAW264.7细胞所占百分比的数量增加,G0/G1期所占百分比的数量下降,这与TMP-A能够促使RAW264.7细胞的增殖相吻合。TMP-A在一定浓度范围内能提高RAW264.7细胞的吞噬能力,促进RAW264.7细胞NO及其相关细胞因子(TNF-α、IL-6)的释放。荧光定量PCR检测结果证实TMP-A能提高RAW264.7细胞内细胞因子基因(TNF-α、IL-6、IL-1β)及iNOS基因的mRNA相对表达。Western Blot法检测结果发现:TMP-A对RAW264.7细胞的内参蛋白β-actin的表达的影响基本不变,iNOS及COX-2蛋白的表达量显著增加。综上所述:TMP-A能够通过激活T、B淋巴细胞、巨噬细胞发挥其免疫调节活性。