光镊-显微拉曼光谱的研究

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本文主要介绍了以动态多功能光镊实验平台为基础,设计搭建的双光镊差分探测和光镊一显微拉曼光谱系统。这两个系统分别应用于生物单分子测量和拉曼光谱分析,尤其是单个活细胞拉曼光谱。   本文的内容总体上分成两个部分:   第一部分主要是构建了双光镊差分探测系统,并对系统的精度进行了测试。根据实验室现有的条件,重新设计制作了四象限探测器(QPD),提高了测量精度和仪器稳定度。提出并实现了基于双QPD的双光镊差分探测系统,实验结果表明,该系统对光镊的控制精度达到1.91nm,测量聚苯乙烯小球的相对位置精度达到4.5nm。同时,该系统能够减少外界因素对测量的影响,例如机械振动,温度波动,激光指向波动等的影响,这些因素都是单分子测量中所必需解决的问题。   第二部分主要构建了光镊一显微拉曼光谱系统,并将该系统应用于实验研究。显微拉曼光谱为生物学单个活细胞研究提供了一种快速、原位、实时检测技术,被日益受到重视。但悬浮细胞在溶液中存在热运动,不易被准确激发,若将其固定在基底上,基片会对细胞的拉曼光谱产生明显影响。我们独立提出了光镊一显微拉曼光谱的设计方案,该方案用一束对细胞损伤极小的红外光镊悬浮固定待测细胞,用另一束可见激光作为拉曼激发光源,从而精确获得细胞局部微区拉曼光谱。该系统以Ar+激光器为光谱激发光源,以Nd:YAG1064nm激光为光镊光源,将两束激光同时耦合到倒置荧光显微镜中,拉曼散射光通过光谱仪分光,用高灵敏CCD对光谱进行采集。光镊用声光偏转器(AOD)和纳米精度PZT转镜进行精确操控。我们用该系统分析了纯化学物质(聚苯乙烯小球,单壁碳纳米),活细胞(大白鼠血细胞,酵母细胞,人白血病U937细胞)的微区拉曼光谱,并将实验结果与用其它方法获得的拉曼光谱做了比较。实验表明,用光镊一拉曼光谱方法所获得的信号有显著提高。我们发现了激光对血细胞吡咯环的影响分为先后两个过程,进行了三维活细胞拉曼光谱和拉曼成像的尝试,利用光镊一显微拉曼光谱系统初步实现并分析了活细胞(U937)的三维扫描光谱。
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