胃癌腹膜转移严重影响患者预后。尽管“种子-土壤”学说作为胃癌腹膜转移的经典理论得到广泛接受,胃癌细胞腹膜转移内在分子机制尚不十分清楚。蛋白是一切生命活动的执行者。为寻找胃癌腹膜转移关键蛋白,本研究首先采用双向凝胶电泳和质谱分析鉴定出腹膜转移中高表达的肌球蛋白MYH9,并通过组织验证和TCGA数据分析证实其在胃癌腹膜转移灶中表达上调并与患者预后相关。其次,通过慢病毒干扰和TALEN基因编辑技术敲低胃癌细胞MYH9表达时意外发现β-catenin的mRNA和蛋白表达均随之下调。此外,我们进一步通过激光共聚焦实验证实MYH9核内表达,并通过核定位信号软件预测、蛋白免疫共沉淀CoIP、染色质免疫共沉淀ChIP、荧光素酶报告基因检测等证实MYH9蛋白通过LEKAKQTLENERGELANEVKVL识别并结合β-catenin启动子区AGCTCC序列促进β-catenin转录。除此,我们使用MYH9相关磷酸酶/磷酸激酶抑制剂筛选胃癌细胞敏感性药物,结果发现Staurosporine通过影响MYH9蛋白1943位点磷酸化抑制CTNNB1转录;裸鼠原位种植瘤模型构建及治疗实验进一步证实Staurosporine可抑制胃癌细胞增殖和转移。最后,通过细胞凋亡、粘附、失巢凋亡检测和裸鼠尾静脉胃癌细胞注射成瘤实验等我们进一步发现,MYH9/β-catenin轴可通过提高胃癌细胞失巢凋亡抵抗能力促进胃癌细胞增殖与转移。总之,本研究发现,IIA型肌球蛋白MYH9存在核内表达并介导β-catenin转录、提高胃癌细胞失巢凋亡抵抗,从而促进胃癌细胞腹膜转移。本课题由四个部分组成,具体内容如下:第一章:腹膜转移相关肌球蛋白MYH9核内表达并影响胃癌细胞株CTNNB1转录水平目的:蛋白质组学技术探索腹膜转移关键蛋白并初步探讨相关分子机制。方法:双向凝胶电泳-质谱分析、qPCR及western blot、免疫组化（包括组织芯片）、TCGA数据分析、细胞免疫荧光激光共聚焦检测和MYH9敲低及过表达稳定株构建（TALEN、慢病毒shRNA干扰及慢病毒MYH9过表达）等。结果:MYH9在正常胃上皮、原发癌灶和腹膜转移癌灶呈递增表达趋势;MYH9敲低的胃癌细胞株β-catenin表达下调;MYH9核内表达并与肌动蛋白β-actin、肌球蛋白轻链MYL9和转录因子TFIIB等共定位。第二章:MYH9核定位及识别CTNNB1启动子区参与调控基因转录目的:探索MYH9影响CTNNB1转录的分子机制。方法:核蛋白提取、CoIP和ChIP等实验;截短质粒构建与荧光素酶报告基因检测;计算机辅助MYH9 3D蛋白模型构建及DNA结合域预测;MYH9核定位信号预测与细胞质粒转染验证等。结果:MYH9通过识别并结合β-catenin启动子区AGCTCC序列促进β-catenin 转录;MYH9 蛋白通过 LEKAKQTLENERGELANEVKVL 结合 β-catenin启动子AGCTCC序列;磷酸激酶抑制剂Staurosporine通过影响MYH9蛋白1943位点磷酸化抑制MYH9介导的CTNNB1转录;Staurosporine腹腔注射能有效抑制胃癌裸鼠原位种植瘤的增殖与转移;位于第1246-1249位点的MYH9氨基酸序列KRKK是MYH9核定位信号。第三章:MYH9/β-catenin轴提高胃癌细胞失巢凋亡抵抗从而促进胃癌腹膜转移目的:探讨MYH9/β-catenin轴在胃癌腹膜转移方面扮演的角色。方法:细胞凋亡、粘附、失巢凋亡检测和裸鼠尾静脉胃癌细胞注射成瘤实验等。结果:MYH9介导的β-catenin表达使胃癌细胞失巢凋亡抵抗能力增强从而促进胃癌细胞增殖与转移。通过上述研究,我们得到结论:腹膜转移相关肌球蛋白MYH9在胃癌组织（特别是腹膜转移灶）中表达上调;MYH9存在核定位并参与胃癌细胞CTNNB1基因转录;MYH9/β-catenin轴提高胃癌细胞失巢凋亡抵抗能力从而促进胃癌细胞增殖与转移。本研究的创新之处:发现胃癌细胞MYH9核内表达,并参与调节CTNNB1转录、促进胃癌细胞失巢凋亡抵抗。