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人乳头瘤病毒(Human Papilloma Virus,HPV)在人群中广泛传播,感染人体皮肤和粘膜引起良性或恶性病变。研究发现寻常疣、尖锐湿疣、宫颈癌、皮肤癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌、乳腺癌等均与HPV感染相关,其中95%的宫颈癌由高危型人乳头瘤病毒感染引起。HPV感染分布存在年龄与地区差异性,不同年龄段、不同地区HPV的感染率和亚型分布不同。我们通过分析扬州地区10473例妇女HPV感染情况,对本地区妇女HPV感染情况进行初步了解,为当地HPV感染性疾病的防治提供依据,同时探讨日本血凝病毒囊膜(Hemagglutinating virus of Japan envelope,HVJ-E)诱导 HPV18 阳性的 Hela 细胞凋亡的作用机制,为肿瘤治疗提供新的手段。一、HPV感染情况分析目的:了解扬州地区妇女人群中人乳头瘤病毒感染情况,为当地HPV感染性疾病的防治提供依据。方法:收集2015年10月--2016年10月在苏北人民医院皮肤科和妇科门诊就诊的18-86岁10473例女性患者宫颈脱落上皮细胞,采用PCR-反向点杂交法检测HPV 21种基因亚型。按患者年龄划分为≤29岁,30-39岁,40-49岁,50-59岁,≥60岁五个年龄组,分析HPV各亚型分布特点,卡方检验比较各年龄组感染率。结果:10473例女性患者,感染HPV 2577例,感染率为24.61%,单一感染1819例,多重感染758例,感染率分别为17.37%,7.24%;≤29岁,30-39岁,40-49岁,50-59岁,≥60岁五个年龄组HPV感染率和HPV感染阳性百分比分别为23.88%,23.36%,23.77%,28.25%,32.27%和 17.66%,27.40%,34.65%,14.82%,5.47%;Hr-HPV 感染检出率为28.40%,其中Hr-HPV-16,52,58,53,39,51检出数位居前六,检出率依次为4.54%,4.33%,3.64%,2.96%,2.17%,1.96%,Hr-HPV-18 检出率较低,仅为 1.46%;Lr-HPV 感染检出率为5.99%,其中Lr-HPV-81,11,6,44检出数位居前四,检出率依次为3.16%,0.93%,0.91%,0.72%。结论:扬州地区HPV感染分布具有年龄差异性及区域性;感染的高峰人群集中在30-49岁,常见高危及低危亚型分别为Hr-HPV-16,52,58,53,39,51和Lr-HPV-81,11,6,44。在扬州地区开展HPV 21种基因亚型检测对扬州地区HPV感染性疾病的防治具有指导意义。二、HVJ-E诱导Hela细胞凋亡机制的研究目的:选取HPV18阳性的Hela细胞为研究对象,探讨HVJ-E诱导Hela细胞凋亡的作用机制。方法:取不同浓度的HVJ-E病毒粒子接种Hela细胞,倒置显微镜观察Hela细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,FACS法检测细胞凋亡率,western blot法检测p53、Bcl-2/Bax、Caspase信号通路、MAPK信号通路蛋白表达情况。为进一步证实Caspase信号通路、MAPK信号通路在HVJ-E诱导Hela细胞凋亡中的作用,用Caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK(50μM),ERK1/2 抑制剂 U0126(18μM),JNK 抑制剂 SP600125(5产M),p38 抑制剂SB203580(12.5产M)分别预处理 Hela 细胞 20min,2h,40min,2h,加入 HVJ-E(800MOI)病毒粒子,CCK-8法检测各组细胞活力,FACS法检测各组细胞凋亡率,western blot法检测Caspase-3、PARP、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白表达情况。结果:HVJ-E作用于Hela细胞,引起细胞生长停滞、皱缩及破裂;随着HVJ-E病毒粒子浓度增加,Hela细胞活力逐渐降低,凋亡率逐渐增加,p53、Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达逐渐增强,Bcl-2抗凋亡蛋白表达逐渐减弱,Bax促凋亡蛋白无明显变化,Bcl-2与Bax比值随病毒浓度增加而降低;在MAPK通路中,ERK1/2、JNK和p38磷酸化蛋白的表达量与病毒浓度呈剂量效应关系。抑制剂处理Hela细胞后可下调HVJ-E诱导的细胞凋亡,减少HVJ-E导致的细胞死亡,同时抑制Caspase-3、PARP、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白表达。结论:HVJ-E能抑制Hela细胞增殖,诱导其发生凋亡;p53、Bcl-2/Bax、Caspase信号通路和MAPK信号通路在HVJ-E诱导Hela细胞凋亡中发挥重要作用。