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以往的观点认为干细胞只能向其来源方向的细胞衍生,这一观点严重限制了干细胞的应用,近年的研究成果证实骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外诱导可以向三个胚层的细胞分化。本研究采用bFGF-壳聚糖载体在体外条件下,对骨髓间充干细胞诱导,观察bFGF-壳聚糖载体能否诱导骨髓间充干细胞向神经元分化及分化为神经元的比例。
从出生后7天的Wistar大鼠的股骨和胫骨中提取骨髓间充质干细胞,取第三代(P3)细胞进行流式实验,检测骨髓间充质干细胞的纯度。取P3细胞分为4组:单纯壳聚糖组;单纯bFGF组;bFGF-壳聚糖载体组;空白对照组:只加入培养基。诱导9天、14天、21天后,Nestin免疫组化染色检测骨髓间充质干细胞向神经干细胞转化情况;β-tubluin-Ⅲ免疫组织化学染色检测骨髓间充质干细胞向未成熟神经元转化情况;MAP-2免疫组化染色检测骨髓间充质干细胞向成熟神经元转化情况;MTT检测不同实验组细胞活性情况:通过Western-blot检测成熟神经元的标记物MAP-2,从分子水平验证:骨髓间充质干细胞可以分化为成熟神经元;扫描电镜结果显示:骨髓间充质干细胞在bFGF-壳聚糖载体诱导作用下可以形成神经球和神经元样细胞。
本实验研究结果显示:从股骨和胫骨中提取得到的细胞传3代后,90%以上的细胞为骨髓间充质干细胞;bFGF-壳聚糖载体可以诱导骨髓间充质干细胞先形成神经干细胞,然后转变为神经元,且形成神经元的比例明显高于单纯壳聚糖组和单纯bFGF组;Western-blot结果显示诱导7天后有少量成熟神经元形成,诱导14天后形成大量成熟神经元,且继续诱导形成成熟神经元的数量增加不明显。由此本课题得出以下结论:在体外条件下,bFGF-壳聚糖载体可以诱导骨髓间充质干细胞高比例向成熟神经元分化(83.54%±2.87%)。