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目的比较正常个体与子宫内膜癌(Endometrial carcinoma,EC)患者体重、腹围、体质指数(Body Mass Index,BMI)、血脂及血浆游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)水平的差异;分析FFA水平与癌组织中KLF4、ERα及下游癌基因/抑癌基因表达之间的相关性;观察高浓度FFA对EC细胞Ishikawa中KLF4、ERα表达的影响,以及对肿瘤细胞生物学行为的影响。探讨KLF4、ERα在肥胖相关子宫内膜癌发生、发展过程中的作用。方法(1)人体组织试验:采集正常体重(BMI<24)个体(n=60)、超重或单纯性肥胖(BMI≥24)个体(n=60)、EC患者(n=30)血浆及子宫内膜组织标本,收集患者临床病理资料。检测受试者血糖、血脂及FFA水平;qRT-PCR检测子宫内膜组织KLF4、ERα、C-erbB-2、Ki-67、P53、Bcl-2 mRNA表达水平,Western-blot检测KLF4、ERα蛋白表达水平;免疫组化法检测子宫内膜组织中KLF4、ERα、C-erbB-2、Ki-67、P53、Bcl-2蛋白表达水平。(2)体外细胞实验:体外培养人EC细胞Ishikawa,不同浓度FFA(棕榈酸,PA)作用EC细胞,qRT-PCR及Western-blot检测KLF4、ERαmRNA及蛋白表达水平;CCK8法检测对肿瘤细胞增殖能力的影响;划痕和Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。(3)利用SPSS17.0软件进行统计学处理。结果1.人体组织实验(1)入组EC患者一般资料分析近6年来,石河子大学医学院第一附属医院收治EC患者人数呈逐年上升趋势;入组的30例肿瘤患者发病年龄范围在32~80岁之间,平均发病年龄(53.97±10.96)岁,主要集中在40-59岁之间,占总患者人数的76.67%;入组患者中,超重/肥胖个体(BMI≥24)有22例,占总患者人数的73.33%。(2)正常对照个体与EC患者血脂及游离脂肪酸水平比较EC患者TC、TG和LDL水平显著高于正常体重个体;EC患者血浆FFA水平显著高于超重/肥胖及正常体重个体,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)子宫内膜组织KLF4、ERα及癌基因/抑癌基因mRNA及蛋白表达水平比较EC患者癌组织中,KLF4、ERα、Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著低于正常体重及超重/肥胖个体;P53、Ki-67、C-erbB-2 mRNA表达水平显著高于正常及超重/肥胖个体,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果显示:KLF4、ERα、Bcl-2在EC患者癌组织表达的阳性率显著低于正常体重个体,差异有统计学意义(P<0.05);P53、Ki-67表达的阳性率显著高于正常体重个体,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)EC患者血浆FFA水平、癌组织KLF4/ERα及各因子表达之间的相关性EC患者血浆中FFA的水平与癌组织中KLF4和Bcl-2 mRNA表达水平显著负相关(P<0.05);与ERαmRNA表达水平负相关(P>0.05);与Ki-67和c-erbB-2 mRNA表达水平显著正相关(P<0.05);与P53 mRNA表达水平正相关(P>0.05)。EC患者癌组织中KLF4与P53 mRNA表达水平显著负相关(P<0.05);与Ki67 mRNA表达水平负相关(P>0.05);与Bcl-2 mRNA表达水平显著正相关(P<0.05);与ERαmRNA表达水平正相关(P>0.05);ERα与P53和Ki-67表达水平负相关(P>0.05);与C-erb B-2mRNA表达水平显著负相关(P<0.05);与Bcl-2 mRNA表达水平正相关(P>0.05)。(5)血脂水平、KLF4/ERα及下游肿瘤相关因子表达与EC临床病理分期的相关性随着肿瘤临床病理分期的加重,患者BMI、TG、TC、LDL及FFA呈递增趋势(P<0.05);KLF4、ERα、Bcl-2 mRNA表达水平呈递减趋势(P<0.05);P53、Ki-67、C-erbB-2 mRNA表达水平呈递增趋势(P<0.05)。2.体外细胞实验(1)不同浓度棕榈酸(PA)刺激EC细胞Ishikawa后,使用CCK-8检测脂毒性和细胞增殖低浓度组活细胞数目显著高于高浓度组,同时发现在20μM组Ishikawa细胞增殖最稳定,而50μM组为其增殖的最大浓度,超过此浓度后则对细胞产生毒性造成肿瘤细胞的死亡。(2)高浓度棕榈酸(PA)对EC细胞Ishikawa KLF4、ERα表达水平的影响50μM棕榈酸刺激Ishikawa细胞后,KLF4及ERα的mRNA和蛋白表达水平显著低对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)高浓度棕榈酸(PA)对EC细胞Ishikawa细胞生物学行为的影响50μM棕榈酸作用Ishikawa细胞后,与空白对照组相比,肿瘤细胞的侵袭和迁移能力显著增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)肥胖后脂代谢紊乱与EC的发生密切相关,EC患者人数增加呈逐年上升趋势。(2)肥胖个体血脂异常,尤其是FFA水平增加与EC密切相关。(3)KLF4、ER低表达可能通过影响下游癌基因/抑癌基因的表达导致EC的发展。