CTB-LK是将蚓激酶(LK)和霍乱毒素B型亚单位(CTB)通过基因融合，并在毕赤酵母中获得表达的一种新型抗血栓肠吸收蛋白，经过体外和小鼠体内实验均证明CTB-LK具有很好的预期酶活和高效肠吸收特性。　　 为提高CTB-LK的表达量，本研究以实验室已有的CTB-LK基因为基础，在不改变所编码氨基酸的情况下，使用基因重叠延伸PCR(gene SOEing PCR)技术，对该基因中4个编码氨基酸的密码子位点进行定点突变，将4个毕赤酵母稀有密码子分别突变成毕赤酵母高频密码子。并构建了优化基因CTB-LKA的中间克隆载体pBluescript SK-CTB-LKA和毕赤酵母表达载体pPIC9k-CTB-LKA，电击转化毕赤酵母GS115，筛选获得了CTB-LKA毕赤酵母表达菌株。　　 对CTB-LKA毕赤酵母发酵产物进行的SDS-PAGE实验表明，在45kD处出现了预期条带。在纤维平板溶栓实验中，发酵产物表现出纤维蛋白溶解酶的活性.表明CTB-LKA蛋白在毕赤酵母内得到了正确的表达和折叠。与同等体积CTB-LK毕赤酵母表达菌株发酵产物的SDS-PAGE电泳条带对比，前者在45kD处的条带更明显。通过使用纤维蛋白平板实验对CTB-LKA毕赤酵母表达菌株发酵产物溶纤活性测定结果表明，在BMGY/BMMY培养基中诱导36h后，酶活力达2450mm2/mL，比CTB-LK毕赤酵母表达菌株发酵产物酶活性提高了1.9倍。以上结果表明，经过密码子优化的CTB-LKA基因与未经过密码子优化的CTB-LK基因相比在毕赤酵母内的表达量得到了提高。