葛根是中医传统的解表药，近40年的研究证明葛根异黄酮具有明显的活血化淤作用，现代多用于高血压、冠心病等。但无论是传统中医还是现代中医临床，葛根及其主要有效成分始终没有用于骨质疏松症及其相关症状的治疗。95年后，国内不断有抗骨质疏松症中药面市，但均基于传统中医理论，采取补肾、补脾等方法，虽然近一、二年在组方中有考虑加入活血成分，但始终没有将葛根组方入药。 葛根异黄酮主要组分与已被证明具有抗骨质疏松症作用的大豆异黄酮在化学结构上比较相似，有一些共存于二者之中，理论上对骨代谢可能有改善作用。但迄今为止，国内外均无葛根总异黄酮或其主要有效成分葛根素对骨代谢影响的基础或临床研究报道。国内亦无任何有关从葛根异黄酮的雌激素样作用出发研究其新的药理作用和可能的应用的文献。 本篇论文的工作分别在整体和细胞水平研究葛根总异黄酮和葛根素对骨代谢的保护作用，并探讨其作用机理。 一、葛根总异黄酮对整体动物模型的抗骨质疏松作用 1 对去卵巢大鼠原发性骨质疏松症的保护作用 10月龄SD大鼠，手术切除双侧卵巢后7天灌胃给予葛根总异黄酮(Total isoflavones of Pueraria,TIP)100和20mg/kg，连续7个月。在第4和7月时测定大鼠全身骨矿总量(Bone mineral content,BMC)和骨矿密度(Bone mineral density, BMD)。7个月时测定血清碱性磷酸酶(ALP)活性、Ca和P水平、股骨和胫骨生物力学性能等，并测定股骨和胫骨的形态指标和灰份、钙和磷元素及一些微量元素的含量，分析股骨和胫骨的微观组织形态等。 结果显示TIP二个剂量组在给药4和7月时均能明显提高大鼠全身BMC和BMD，增加股骨和胫骨的最大负荷和结构强度；并使股骨皮质骨厚度明显增加，腰椎皮质骨厚度和骨小梁相对面积增加，股骨和胫骨的比重、灰重、钙、磷含量和某些 p J 浙江大学博士学位论文C） 微量元素含量均明显提高，同时TIP明显缓解去卵巢引起的子宫和肾上腺萎缩。 本研究结果提示TIP能明显抑制雌激素缺乏引起的骨矿元素丢失，增加骨密度， 提高骨强度。其机理可能和它的弱雌激素样作用有关。对肾上腺的刺激作用可能也源 于它的雌激素样活性。 二对地塞米松致大鼠继发性骨质疏松症的保护作用 4月龄 SD大鼠，每周 2次肌肉注射盐酸地塞米松 1．5 i，复制骨质疏松症病 理模型，同时 D服 wl 00J0和 25 i。在给药 3和 6个月时测定 B皿和 Bm， 6个月时测定股骨和腔骨的重量、比重和生物力学性能等指标。 结果显示 ml 00和 50 m她给药 3和 6个月 Bm和 BMC显著增加，股骨和 腔骨的物理参数得到明显改善，股骨和腔骨的生物力学性能显著增强，而25呐 组则无明显效果。 此结果显示11P对皮质激素诱导的骨质疏松症有一定预防作用，但其作用强度比 在雌激素缺乏模型中的强度弱得多，这也和Tll，的作用机理（雌激素样作用）相吻合。 二、葛根异黄酮抗骨质疏松作用的机理研究 ITIP和葛根素对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响 实验利用新生SD大鼠头盖骨成骨细胞培养技术，选用培养2－5代的细胞，暴露 在含Thl，或葛根素的培养液一定时间后，测定成骨细胞增殖活性和分化活性，流式细 胞术分析细胞周期变化。 实验结果发现 11P和葛根素在 10“p．16X10－’咖时，接触 ill天能明显增加成 骨细胞NlT显色和细胞数量，提高细胞内ALP活性，流式细胞分析显示处于分裂相 的细胞比例显著增加。这一结果提示lP能直接刺激成骨细胞的增殖功能。 2ill？和葛根素的雌澈素样活性及其特点 通过观察liP和葛根素对雌激素缺乏动物（去卵巢大鼠和幼年小鼠）、正常动物（成 年小鼠和大鼠）以及雌激素水平异常升高动物（和EZ合用）子宫重量的影响，分析它 有无雌激素样作用及其作用特点。 结果发现lP和葛根素能明显增加去卵巢大鼠阴道涂片中角化细胞数量，部分恢 复去卵巢大鼠的性周期；使去卵巢大鼠和幼年小鼠子宫重量明显增加，这种作用呈明 显的剂量依赖性。对正常成年小鼠的子宫生长无明显影响，在合用雌二醇时，葛根素 和TIP均使雌二醇的促子宫生长作用明显减弱，表现为抗雌激素样作用。 2 L瞩回川 浙江大学博士学位论文（2002） 结果表明TIP和葛根素显示典型的雌激素受体部分激动剂的特征。 三、葛根异黄回对去卵巢大鼠的降血脂作用 WI 00和 20In曲使去卵巢大鼠血清 TC水平明显下降，HDL（水平略有下降， 二者的比值显著降低?