南极拟三列真藓MBF1基因的抗逆机制研究

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在自然界中,低温、土壤盐碱化、干旱、水涝等会对植物的生长和生存产生不利的影响,并限制全球的农作物地域性分布和粮食产量,这些环境因素被称为逆境。转录因子和调节基因是介导植物对逆境胁迫适应的主要因素。转录辅激活因子与转录因子的活性密切相关,它能通过增强转录因子与顺式作用元件相结合,达到增强转录活性的目的。MBF1就是一个转录辅激活因子,它在进化上是高度保守的。MBF1参与了包括激素调节的脂类代谢、中枢神经系统发育、内皮细胞分化和组氨酸新陈代谢等不同的生物进程。不同生物体内的MBF1蛋白通过与GCN4、c-Jun、ATF1或其他核受体相互作用与TBP连接,最后激活基因的转录。本研究采用RACE-PCR的方法从南极拟三列真藓(Bryum pseudotrique)中分离得到了MBFl基因,其大小为447bp,并将其命名为BpMBF1。将其与已发表的其他生物MBF1氨基酸序列进行同源性比较,发现具有较高的同源性。蛋白质三维结构预测分析结果显示BpMBF1和AtMBF1c其蛋白质C-末端结构相似性较高,因此本研究同时还克隆了拟南芥的AtMBF1c基因。克隆到基因后,我们构建了植物双元超表达载体pBI121-BpMBF1和pBI121-AtMBF1c,载体上包含35S启动子和NOS终止子。通过农杆菌介导的花序侵染法,将CaMV35S启动子调控下的BpMBF1和AtMBF1c转入模式植物拟南芥Col野生型。同时还将BpMBF1(?)AtMBF1c转入Atmbf1c纯合突变体中以互补表型。对野生型、突变体、过表达和突变体互补表型植株施加盐胁迫和冷胁迫,结果表明BpMBF1在逆境胁迫中发挥了重要功能。并且在响应冷胁迫过程中BpMBF1从细胞质转移到了细胞核中。利用酵母双杂交鉴定出了包括组蛋白H3(Histone H3)、脱氢酶(Dehydrogenase)以及酰基辅酶A合成酶(Acyl-CoA synthetase)等23个与BpMBF1相互作用的基因,这些基因编码的蛋白中有多个与蛋白质和糖类的代谢有关,这一结果表明BpMBF1可能通过调节这些基因的相互作用从而影响植物的抗逆性。
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