【摘 要】
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为探究Ce4+诱导悬浮培养东北红豆杉细胞凋亡的关键中下游信号事件以及较为完整的分析整个凋亡信号通路，以Ce4+作用下东北红豆杉细胞凋亡的下游蛋白酶特异表达为研究切入点并展开一系列蛋白水平的分析，以期能进一步阐述Ce4+诱导东北红豆杉细胞凋亡的信号事件以及这些信号间的相互关系。并在此研究结果基础上，对东北红豆杉细胞凋亡的整个信号转导机制进行了分析和设想。(1)在Ce4+诱导的红豆杉凋亡体系中通过胶内
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为探究Ce4+诱导悬浮培养东北红豆杉细胞凋亡的关键中下游信号事件以及较为完整的分析整个凋亡信号通路，以Ce4+作用下东北红豆杉细胞凋亡的下游蛋白酶特异表达为研究切入点并展开一系列蛋白水平的分析，以期能进一步阐述Ce4+诱导东北红豆杉细胞凋亡的信号事件以及这些信号间的相互关系。并在此研究结果基础上，对东北红豆杉细胞凋亡的整个信号转导机制进行了分析和设想。
(1)在Ce4+诱导的红豆杉凋亡体系中通过胶内酶活性检测实验，发现细胞凋亡时特异表达的三种核酸酶TNU1、2、3，分子量为34kD、21kD和19kD,它们的表达和细胞凋亡存在相应时序对应性。三种核酸酶TNU1、2、3都是Ca2+/Mg2+依赖性核酸酶，酶活性最适pH值为中性(pH6.8)，TNU1从pH值6.8到7.5活性逐渐降低，而TNU2和TNU3在pH值7.5时已无明显酶活性。
(2)从诱导和抑制两个角度揭示了类caspase-3酶在Ce4+诱导东北红豆杉细胞凋亡过程中起重要的信号调控作用。通过二维凝胶电泳，发现与类caspase-3酶激活相关的15个差异蛋白表达。其中类caspase-3酶抑制组的12个蛋白表达丰度和对照组相近，而其它3个蛋白点差异表达规律和这12个蛋白点有所不同。结合蛋白质谱分析对其中一些蛋白点进行了初步研究。
(3)Ce4+诱导东北红豆杉细胞凋亡过程中有明显的O2-·进发。通过westernblotting揭示p-ERK活性的抑制而不是激活是诱导细胞凋亡的一条信号途径，O2-·进发与p-ERK活性抑制应是两条并行相关的信号通路，O2-·进发能进一步调控p-ERK活性。通过添加各种抑制剂，发现O2-·进发介导了下游类caspase-3酶和三种核酸酶的激活，TNU1的活性不依赖于类caspase-3酶激活，而TNU2、3则可能是位于类caspase-3酶途径的下游，并由类caspase-3酶激活。
(4)类caspase-3酶激活是凋亡的关键中下游信号事件，但还应存在其它介导凋亡的下游蛋白分子。O2-·进发并不是激活类caspase-3酶的唯一信号路径，与O2-·进发平行的信号路径或者在其上游信号事件，也可直接激活类caspase-3酶。
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