甘蓝型油菜BnWRKY41-1转录因子在拟南芥叶片花青素积累方面的功能分析

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作为我国种植面积最大的油料作物和世界第三大消耗食用油的来源,油菜在保障粮食安全中占据着举足轻重的地位。花青素在改善菜籽油品质、提供油菜选育的性状标记、提高油菜抗逆性和培育多彩油菜品种等方面发挥着积极的作用。为了优化花青素对油菜的效用,需要不断完善油菜花青素合成路径相关的基因网络。本研究发现BnWRKY41-1转录因子通过负调控五个花青素积累相关基因的表达,抑制了拟南芥叶片的花青素含量。为进一步揭示BnWRKY41在油菜中的功能奠定了基础。主要结果如下:1.在甘蓝型油菜中,共存在两个WRKY41同源拷贝,分别为BnWRKY41-1(XP013686534.1)和BnWRKY41-2(XP013695247.1)。本研究从Westar油菜品种中克隆得到BnWRKY41-1。蛋白质序列比对和系统进化分析表明,BnWRKY41-1与拟南芥AtWRKY41的亲缘关系较近,两者功能域的相似度是92%,所以两者调控的下游基因和造成的表型变化很有可能是相似的。2.将pGreen-35S:BnWRKY41-1-6HA转入拟南芥wrky41-2突变体(SALK028449.34.95.x),用纯合的T3代转基因株系进行实验。在发芽后15、20和25天(DAG),wrky41-2的叶片花青素含量均显著高于Col-0,而BnWRKY4-1能够恢复wrky41-2的叶片花青素含量。所以AtWRKY41和BnWRKY41-1转录因子在花青素合成方面具有相似的生物学功能。3.选择花青素含量差异增加最快的时期(20 DAG),取莲座叶进行以下实验。首先,利用RNA-seq和qRT-PCR,发现和Col-0野生型相比,五个花青素含量相关的差异基因(ACR-DEGs,anthocyanin content related differentially expressed genes)在wrky41-2突变体中被显著上调,分别是AtMYB75、AtMYB111、AtMYBD、GSTF12和AT1G68440。并且,通过在wrky41-2突变体中过量表达BnWRKY41-1,这些ACR-DEGs的表达量降低到了野生型的水平。最后,ChIP-qPCR的结果显示,AtWRKY41和BnWRKY41-1转录因子在部分ACR-DEGs的启动子区域具有结合位点,所以AtWRKY41和BnWRKY41-1间接或直接负调控以上五个ACR-DEGs的表达。
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