和厚朴酚对大鼠脊髓损伤神经保护作用的实验研究

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实验目的:研究和厚朴酚对大鼠脊髓损伤后炎症反应、氧自由基及凋亡的影响,探讨和厚朴酚的神经保护作用及其机制。实验方法:Sprague-Dawley雌性大鼠99只,体重为220-250g,随机分为假手术组(SHAM组、33只)、脊髓损伤组(SCI组、33只)及和厚朴酚组(HNK组、33只)。采用Allen’s法制造大鼠胸10挫伤模型,SHAM组给予胸10椎板切除,不予打击。HNK组术后1h给予20mg/kg的和厚朴酚腹腔注射,连续给药3天。术后不同时间点各组分别取大鼠损伤脊髓节段,HE染色观察组织病理学变化,ibal免疫组化观察小胶质细胞活化情况;ELISA检测促炎症因子水平;检测MPO活性、SOD活性、MDA水平;免疫荧光染色、WESTERN BLOT观察Caspase3表达;神经元Neun荧光染色、计数。术后后肢运动功能BBB评分,观察2周。实验结果:1.BBB评分结果:SHAM组评分基本没有变化,SCI组、HNK组第一天评分为0分,SCI组、HNK组大鼠后肢运动从第三天出现恢复,评分呈上升趋势。术后7天开始HNK组较SCI组,后肢运动功能明显改善(P<0.05)。2.HE染色:术后24h电子光学显微镜下观察到SHAM组镜下见正常组织结构:灰、白质分界清晰,细胞形态正常;SCI组可见组织水肿、出血、中性粒细胞浸润及结构疏松,灰白质结构分界不清等明显病理改变;与脊髓损伤组相比,HNK组组织出血、水肿明显减轻,灰白质结构分界可见。3.神经元NeuN荧光染色结果:术后一周在损伤脊髓节段周围区,各组均可见神经元,与SHAM组比较,SCI组与HNK组神经元减少(P<0.05),HNK组神经元数量多于SCI组(P<0.05)。4.免疫组化观察小胶质细胞:术后24h,SHAM组中小胶质细胞处于静息状态;SCI组中活化小胶质细胞数量明显增多,胞体变圆、突起粗短;而HNK组中活化的小胶质细胞数量明显减少。5.MPO活性检测结果:MPO活性反应了中性粒细胞浸润、活化程度,术后24h时HNK组、SCI组与SHAM组比较,MPO活性明显升高,即中性粒细胞浸润明显增多,统计学差异显著(P<0.01);与SCI组比较,HNK组MPO活性明显降低(P<0.05)。6.ELISA检测结果:术后24h与SHAM组相比,SCI组、HNK组TNF-a、IL-1β、IL-6水平均显著升高(P<0.05)。HNK组较SHAM组TNF-a、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05)。7.SOD、MDA检测结果:术后24h与SHAM组相比,HNK组、SCI组SOD值均升高、MDA含量均降低(P<0.05)。与SCI组相比,HNK组SOD值上升、MDA含量降低(P<0.05)。8.Caspase3免疫荧光结果:术后3d SCI组有大量Caspase3表达阳性细胞;HNK组Caspase3阳性细胞较SCI组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。9.C-caspase3Western Blot结果:术后3d SHAM组C-caspase3水平较低;与SHAM组比,SCI组、HNK组C-caspase3表达明显增高(P<0.05);HNK组C-caspase3水平较SCI组降低(P<0.05)。结论:和厚朴酚能够降低炎症反应,清除氧自由基,减少神经细胞凋亡,发挥在脊髓损伤中的神经保护作用。
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