论文部分内容阅读
目的：本课题通过研究凝溶胶蛋白（Gelsolin）在结直肠癌组织及血浆中的表达情况，分析其与结直肠癌组织类型、肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移及Dukes分期等临床病理特征间的关系，探讨其在结直肠癌发生、浸润转移过程中可能发挥的作用，为解释结直肠癌发生、发展提供理论依据，探讨其作为结直肠癌相关的生物标志物的可能性，评估其在结直肠癌诊断、治疗、预后估计等方面的临床应用价值。方法：选取河北医科大学附属唐山市工人医院2010年1月-2011年12月的结直肠癌患者共228例，取患者术后石蜡存档蜡块，包括肿瘤组织及相应癌旁无瘤粘膜组织（距肿瘤组织2cm以上，病理证实无癌细胞），用组织芯片技术制作蜡块标本并重新切片。部分切片因免疫组化组织修复时组织脱落，其中癌组织剩余220例，对应的无瘤粘膜组织剩余143例，采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色方法（SP法）检测剩余的结直肠癌组织及癌旁无瘤粘膜中Gelsolin蛋白的表达。收集2011年5月至2012年11月唐山市工人医院结直肠癌手术标本共20例，每例标本取结直肠肿瘤组织、距肿瘤边缘约2cm处癌旁无瘤粘膜组织，提取20例结直肠癌组织及其中10例癌旁无瘤粘膜组织中的总RNA，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应技术（qRT-PCR），以β-actin的mRNA相对定量Gelsolin基因的mRNA表达，比较结直肠癌组织与癌旁无瘤粘膜中Gelsolin mRNA的表达情况。收集40名结直肠癌患者手术前以及20名健康志愿者清晨空腹肘正中静脉血，离心后收集上清，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）分别检测结直肠癌患者组及健康对照组血浆中Gelsolin含量。使用SPSS13.0统计软件对Gelsolin表达情况进行处理分析，计量资料用均数±标准差(±s)的形式表示，计数资料以百分比的形式表示，两组或多组间计量资料的比较采用t检验或单因素方差分析，阳性率的比较采用χ~2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义，分析Gelsolin的不同表达与年龄、性别、肿瘤大小、组织学分型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期等各临床病理特征间的关系。结果：1.Gelsolin蛋白在结直肠癌组织中的表达：Gelsolin不同程度地表达于结直肠癌组织及癌旁无瘤粘膜组织中。Gelsolin蛋白阳性表达呈棕黄色物质，在正常的结直肠腺体组织中呈弥漫性分布，主要表达于上皮细胞、内皮细胞和肌细胞，而在结直肠癌组织中的表达明显减少甚至缺如，阳性染色主要见于上皮细胞胞膜，偶可见杯状细胞胞质染色。Gelsolin蛋白在结直肠癌组织和癌旁无瘤粘膜组织中的阳性表达率分别为63.64%（140/220）、96.50%（138/143），结直肠癌组织中Gelsolin表达水平低于癌旁无瘤粘膜组织，具有统计学差异（P<0.05）。Gelsolin在结直肠癌中的表达水平与肿瘤的浸润深度及Dukes分期均有关，其中，在肿瘤侵及浆膜及浆膜外较肿瘤仅限于肠壁内为高，Dukes’A期较其余各期为高，差异均有统计学意义（P<0.05），Gelsolin表达与不同性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、淋巴结转移等病理特征之间的差异均无统计学意义（P>0.05）。2.Gelsolin mRNA在结直肠癌组织中的表达：Gelsolin mRNA在大癌组织和癌旁无瘤粘膜组织中的相对表达比值分别为0.00046±0.00024、0.00643±0.00275，差别有统计学意义（P<0.05），即Gelsolin mRNA在结直肠癌组织中的表达量低于癌旁无瘤粘膜组织。Gelsolin mRNA的相对表达量在不同性别、年龄、组织学类型、分化程度、有无淋巴结转移中的差别均无统计学意义（P>0.05）.3.Gelsolin蛋白在结直肠癌患者血浆中的表达：结直肠癌患者术前血浆Gelsolin平均水平为（318.15±40.71）μg/ml，高于健康对照组血浆平均水平（250.85±21.65）μg/ml，差异具有统计学意义（P<0.05）。Dukes’A、B、C期结直肠癌患者术前血浆Gelsolin平均水平分别为（275.75±31.92）μg/ml、（300.89±21.64）μg/ml、（339.65±34.43）μg/ml，结直肠癌患者术前血浆Gelsolin水平随着Dukes分期的进展而升高，除Dukes’ A期与Dukes’ B期外，Dukes’ A期与Dukes’ C期、Dukes’ B期与Dukes’ C期患者血浆Gelsolin水平之间的差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：1.Gelsolin mRNA及其蛋白在结直肠癌组织中的表达均明显降低；Gelsolin蛋白在结直肠癌患者血浆中表达上调；2.Gelsolin的表达与结直肠癌浸润深度及Dukes分期等有关，提示其与结直肠癌的浸润转移及预后有密切关系；3.Gelsolin在结直肠癌患者血浆中阳性表达，有望成为结直肠癌的生物标志物。