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目的:细胞生物材料支架是组织工程研究中的关键,本研究探讨丝胶蛋白对三维多孔水源性丝芯蛋白支架的改性作用,使三维多孔水源性丝蛋白支架具有与海绵一样优良的弹性等机械特性,从而为其在组织工程中的应用提供一种比较优良的材料。
方法:
1)将蚕丝利用冰冻法提纯丝胶蛋白;
2)将蚕丝用0.02 mol/L Na2CO3水溶液水煮、洗涤去除丝胶,提纯丝芯蛋白;
3)用9.3 mol/L的LiBr溶液作溶剂,生成混合丝蛋白+LiBr水溶液,再将此溶液用透析袋与蒸馏水透析,得到混合丝蛋白水溶液,为得到浓缩的混合丝蛋白溶液,再用25 wt%的聚乙二醇溶液透析脱水,浓度为8 wt%的混合丝蛋白水溶液可以通过将浓缩后的混合丝蛋白水溶液用蒸馏水稀释获得;
4)用盐析法丝制作三维多孔水源性混合丝蛋白支架。
结果:
1).我们选用冰冻法提纯丝胶蛋白,丝胶回收率可在70%以上;
2).用盐析法制作的三维多孔水源性混合丝蛋白支架在形态上同三维多孔水源性丝芯蛋白支架并没有区别;
3).X-线衍射及红外光谱检测分析结果显示三维多孔水源性混合丝蛋白支架结晶区峰值和天然蚕丝中β-sheet结晶区的峰值相同;
4).通过电镜扫描观察测量混合丝蛋白支架孔隙大小及分布情况显示其孔隙均>100 μm,大小较一致,分别均匀,相互贯通;
5).水源性三维多孔混合丝蛋白支架的孔隙率均>90%;
6).机械性能检测结果显示三维多孔水源性丝蛋白支架具有与海绵一样优良的缩复性即弹性等机械特性;
7).体外蛋白酶降解实验结果显示三维多孔水源性混合丝蛋白支架与三维多孔水源性丝芯蛋白支架的降解速率很接近。
结论:通过丝胶蛋白对三维多孔丝蛋白支架进行了成功改性,制作的三维多孔水源性混合丝蛋白支架具有与海绵一样优良的缩复性即弹性等机械特性,并且并且其形态和结构具有可调控性,在体外酶作用下可以完全降解,从而为其在组织工程中的研究应用奠定了基础。