本实验研究的目的是探讨负载人肝细胞癌肿瘤排斥抗原肽SLIVHLNEV（C-met突变肽）的人脾脏树突状细胞诱导的特异性抗肿瘤作用。我们首次以脾脏作为DC的来源，首先在无菌条件下分离脾淋巴细胞，然后利用树突状细胞及其前体的半贴壁性，得到富集DC前体的细胞群，经流式细胞仪检测，其表型为：CD3-、CD14-、CD19-、CD40+（33.1％）、CD34+（19.7％），决定应在具有GM-CSF+TNF-α条件下进行培养脾脏来源的DC前体。我们将抗人CD40mAb加入培养液中，有效地提高了成熟DC的数量。通过扫描电镜观察细胞表面结构特征，用流式细胞仪和免疫组织化学方法检测不同培养天数的细胞表型。将本室研究发现人工合成的肝癌排斥抗原肽SLIVHLNEV冲击致敏DC，再用其活化自体T淋巴细胞，进行体外抗肿瘤实验，同时接种到人源化的裸鼠或荷人肝癌细胞系HHCC移植瘤的裸鼠体内，通过连续测量瘤体积、观察裸鼠生长状况，研究其预防和抑制肿瘤的作用。结果表明：经免疫组织化学检测，扩增培养后，成熟（HLA-DR+）的DC纯度达到95％以上。经扫描电镜观察发现，细胞向外伸出许多扁平状或钝圆的突起。流式细胞仪结果显示HLA-DR和CD40双阳性细胞随培养时间呈明显升高趋势，免疫组织化学染色显示相似结果。体外抗肿瘤实验表明负载SLIVHLNEV的DC疫苗对T淋巴细胞杀伤活性有明显促进作用。裸鼠模型显示预防接种组瘤体积小于对照组（p＜0.05）。治疗组瘤体积生长缓慢，瘤体积亦小于对照组（p＜0.05）。研究结果表明：①.DC疫苗活化的T细胞通过诱导裸鼠HHCC移植瘤细胞变性、坏死，抑制移裸鼠移植 第四军医大学硕士学位论文 瘤的生长。②．肝癌排斥抗原肽具有较强的引发特异性抗肝癌免疫反应的 功能，为进一步进行临床试验展示了乐观的前景。