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从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NA1基因的质粒PMD18-TNA1中切下NA1基因片段,将其亚克隆到pSY538的EcoRI位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的SmaI位点,然后切下同时含有NA1及LacZ基因的片段再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的NotI位点,从而构建出表达AIV NA1基因的重组禽痘病毒转移载体。应用脂质体介导的方法将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,经过蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化、PCR和Western-blot检测等,结果获得了能稳定表达NA1蛋白的重组禽痘病毒。从含有禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/21/02(H9N2)NA2基因的质粒PBD-NA2中扩增出NA2基因片段,将其克隆到PCAGG的SmaI位点,同时将pSY538用EcoRI和BamHI进行双酶切,然后用EcoRI和BglII将NA2基因切下,将其粘端亚克隆到pSY538的EcoRI和BamHI位点,以下同NA1的重组禽痘病毒的构建,结果获得了能稳定表达NA2蛋白的重组禽痘病毒。结果证明所获得的重组病毒rFPV-NA1和rFPV-NA2遗传性状稳定,并能够对其重组的单个外源基因进行表达,且在培养细胞中的表达产物具有与AIV蛋白相似的生物学特性。用重组病毒rFPV-NA1和rFPV-NA2分别免疫接种5周龄SPF鸡,然后分别用HPAIV LN/02(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)进行致死剂量的攻击。结果rFPV-NA1免疫组攻H5N1病毒后全部死亡;它们对H7N1毒株攻击的保护率仅有13.3%。rFPV-NA2免疫组攻H5N1病毒后全部死亡;它们攻H7N1病毒后也全部死亡。空白对照组在攻毒后全部发病并死亡。