【摘 要】
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蔗糖非发酵相关蛋白激酶SnRK(SNF1-related protein kinase )是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过多种复杂的信号传递途径对干旱、高盐及低温胁迫作出响应,激发下游抗逆基因的
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蔗糖非发酵相关蛋白激酶SnRK(SNF1-related protein kinase )是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过多种复杂的信号传递途径对干旱、高盐及低温胁迫作出响应,激发下游抗逆基因的表达,提高植物的抗逆性。本研究基于杨树全基因组序列信息,克隆杨树SnRK基因,并进行遗传转化研究。主要研究结果如下:1.根据已知的拟南芥SRK2C基因序列,在杨树基因组上定位并克隆获得了3个SnRK基因,初步命名为PtSnRK-1、PtSnRK-2和PtSnRK-3。序列分析结果表明3个基因的开放阅读框(ORF)分别为1356bp、1329bp和1320bp,推测分别编码451个、442个和439个氨基酸(aa)残基的蛋白质,分子量分别约为50.22Kda、49.22Kda和48.89Kda。3个PtSnRK基因均具有保守的Protein kinase结构域和NAF结构域。2.利用Gateway技术构建了3个克隆基因的过量表达载体pH35GS:: PtSnRK-1、pH35GS::PtSnRK-2和pH35GS::PtSnRK-3。经农杆菌介导将这3个基因转入欧美杂种山杨T89和南林895杨,通过最适遗传转化条件及潮霉素筛选获得了一批转PtSnRK-1、PtSnRK-2和PtSnRK-3基因欧美杂种山杨T89和南林895杨植株,并对转基因植株进行了分子生物学鉴定和抗逆生理指标检测。3.PCR和实时定量RT-PCR检测结果表明目的基因已经整合进杨树基因组并超量表达。逆境(PEG6000和NaCl处理)下对叶绿素含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性和叶片相对含水量等测定结果显示,3个基因的导入均显著地提高了转基因植株的抗旱和耐盐能力。
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