盾壳霉生长和产孢相关基因CmTERT的功能研究

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盾壳霉是植物病原真菌核盘菌的重寄生菌,在菌核病的生物防治中具有举足轻重的作用。在前期,实验室通过农杆菌介导的转化(ATMT)获得了盾壳霉的T-DNA插入突变体库。通过筛选发现突变体ZS-1TN4685表型异常。通过克隆T-DNA插入位点的侧翼序列,并将其在盾壳霉基因组中进行比对,发现破坏了基因Cm03805。本研究以ZS-1TN4685为研究材料,并对基因Cm03805的功能进行了初步研究,研究结果如下:1.与野生型ZS-1相比,突变体ZS-1TN4685菌落形态不规则,生长速率下降。在生长后期,菌落生长停止,且不能长满整个培养皿。在显微镜下观察发现菌丝尖端弯曲、分枝增多。此外,突变体产孢量下降,但孢子寄生菌核的能力无显著差别。2.将基因Cm03805在NCBI上进行比对发现该基因含有端粒酶RNA结合结构域和端粒酶逆转录酶特异性结构域,故将该基因命名为CmTERT。克隆该基因发现其全长为4155 bp,含有10个外显子,9个内含子,编码1168个氨基酸。3.通过本地blast比对,发现基因CmTERT在盾壳霉基因组中为单拷贝。进化分析发现该蛋白与番茄匍柄霉的端粒酶逆转录酶具有较高的同源性。对CmTERT的表达动态分析发现该基因在分生孢子器形成起始期表达量高。4.根据同源重组的原理,对CmTERT进行了基因敲除,获得了4株该基因的敲除转化子。与野生型ZS-1相比,基因CmTERT的敲除突变体生长速率降低,菌丝尖端弯曲、分枝增多,生物学产量降低,菌丝ROS含量升高,产孢量下降,但孢子寄生菌核的能力无明显变化。这些特征与突变体ZS-1TN4685基本一致。以上研究结果表明,基因CmTERT参与调控盾壳霉的生长和产孢量,但不影响孢子的寄生能力,这对于深入理解盾壳霉的生长发育具有重要意义。
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