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目的通过检测细胞凋亡率、ROS含量和线粒体膜电位变化以及相关凋亡蛋白相对表达水平,探讨MC-LR是否通过线粒体介导的caspase依赖性途径诱导睾丸支持细胞凋亡,为保护、预防和治疗MC-LR所致的生殖系统损伤提供科学依据。方法1.原代细胞培养：从青春前期(日龄18-20天)SD大鼠睾丸中提取、分离、纯化睾丸支持细胞,建立原代培养睾丸支持细胞模型。2.CCK-8实验：CCK-8试剂盒检测不同浓度MC-LR (0,1,5,10,20,40, 60 p.g/ml)作用睾丸支持细胞24h后细胞增殖变化,确定ICso,设置ICso/4、IC50/2、IC50为后续实验浓度。3.实验分组：睾丸支持细胞分为对照组(培养液)、ICso/4、IC50/2、IC50 MC-LR组和Caspase抑制剂zVADfink (50pmol/L)+IC50MC-LR组以及抗氧化剂NAC(10mmol/L)+IC50MC-LR组,继续培养24h。4.凋亡率检测：AnnexinV-FITC/PI双染联合流式细胞仪检测各处理组细胞凋亡率变化。5.活性氧检测：ROS试剂盒联合荧光显微镜和流式细胞仪检测不同浓度MC-LR和NAC预处理组细胞内ROS荧光值变化。6.线粒体膜电位：JC-1试剂盒联合流式细胞仪检测不同浓度MC-LR和NAC预处理组细胞线粒体膜电位变化。7.蛋白检测：利用Western Blot法检测各处理组细胞内细胞色素C、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9以及Caspase-3蛋白相对表达量变化。结果1.不同浓度MC-LR (0,1,5,10,20,40,60μg/ml)作用睾丸支持细胞24h后,细胞增殖被明显抑制,且随着MC-LR浓度升高,增殖抑制率显著升高(P<0.05)。经计算MC-LR作用睾丸支持细胞24h ICso为32μg/ml,后续实验浓度分别为：8μg/ml,16μg/ml和32μg/ml。2. MC-LR能诱导睾丸支持细胞凋亡,8μg/ml,16μg/ml和32μg/ml染毒组细胞凋亡率分别为3.9000%±0.200%、6.000%±0.100%、27.266%±0.115%,随着MC-LR浓度升高,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。3. MC-LR能增加睾丸支持细胞内ROS含量。荧光显微镜和流式结果均显示：随着MC-LR浓度升高,荧光值明显升高,细胞内ROS含量显著增加(P<0.05)。4. MC-LR能降低睾丸支持细胞线粒体膜电位,且随着MC-LR浓度升高,线粒体膜电位显著降低(P<0.05)。5. MC-LR能增加睾丸支持细胞Cyt-c、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9以及Caspase-3的相对表达量,且随着MC-LR浓度升高,四种蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。6. Caspase抑制剂zVADfmk预处理可使32μg/ml MC-LR组细胞凋亡率由27.266%±0.115%下降至9.633±00.057%(P<0.05),且能显著降低四种蛋白的相对表达量(P<0.05)。7.抗氧化剂NAC预处理可使32μg/ml MC-LR组细胞凋亡率由27.266±0.115%下降至13.200%±0.100%(P<0.05),且明显降低细胞内ROS含量、抑制线粒体膜电位降低以及降低四种蛋白的相对表达量(P<0.05)。结论1.微囊藻毒素-LR在一定浓度范围内可明显抑制睾丸支持细胞的增殖,并诱导其凋亡。2.线粒体介导的caspase依赖性途径可能是微囊藻毒素-LR诱导睾丸支持细胞凋亡的主要途径之一。3.活性氧参与了微囊藻毒素-LR诱导睾丸支持细胞凋亡过程。