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本试验以蜜枚和JM等西瓜品种的纯合二倍体及其人工诱导的同源四倍体、三倍体为材料,首次对不同倍性西瓜AFLP标记的分子遗传变异、花粉电镜扫描形态、叶片微形态特征、光合特性等进行了详细的研究,同时对其耐盐、耐冷、耐淹的抗逆机理差异进行了比较,从分子生物学、细胞学、生理生化等不同领域和层面,探讨了西瓜染色体倍性、基因剂量和性状表达的关系,为西瓜多倍体育种及抗逆育种提供了重要理论依据。通过试验研究取得以下主要结果: 1.分子遗传变异:利用AFLP技术,共筛选48对引物组合,获得4800-5000条位于50-600bp的片段,大部分引物组合扩增出的不同倍性之间的AFLP条带没有明显差异;蜜枚西瓜具有多态性的条带有3条,其中1条为四倍体特有带,1条为三倍体特有带,1条为二倍体特有带;JM西瓜具有多态性的条带有7条,3条为JM4x特有带,2条为JM3x特有带,2条为JM2x特有带,不同倍性西瓜之间多态性较低。同源四倍体和相应的二倍体相比,有特异性片段的消失或增加,推测在秋水仙素诱导过程中引起DNA的核苷酸碱基序列改变或同源四倍体等位基因发生漂移。也有扩增出双亲皆有或皆无而三倍体F1消失或增加的DNA片段,推测双亲杂交后的受精过程中基因可能发生了变化。 2.花粉粒微形态差异:12个西瓜品种的花粉电镜扫描观察表明,不同倍性西瓜的花粉粒形状、大小、萌发孔、外壁纹饰等方面有明显差异,二倍体花粉多为近长球形,极轴/赤道轴(P/E)值为1.283,具3孔沟,花粉粒整齐一致;四倍体花粉为圆球形,P/E值为1.111,有3孔沟,4孔沟,多孔沟,其中有异形花粉,粘连花粉和空瘪花粉等;三倍体花粉全部为空瘪花粉。从孢粉学角度阐述了四倍体花粉萌发率低,三倍体花粉不育的原因。 3.叶片表皮微形态特征:扫描电镜观察结果表明,随着西瓜倍性的增加,叶片保卫细胞和表皮细胞增大,单位叶面积上的气孔和表皮细胞的数目却减少,细胞的大小和数目成反比。通过FDA荧光记数法观察4x、3x、2x的保卫细胞对中的叶绿体数目分别为19.9±3.4,15.9±2.2,11.5±1.5。其比例约为4:3:2,与西瓜的倍性一致。根据此方法可以快速有效地对西瓜染色体倍性进行早期鉴定。 4.光合特征和光合速率日变化:随着西瓜染色体倍性的增加,叶面积、比叶重、单位叶面积的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量增加,而单位鲜重的光合色素含量却减少,倍性之间差异显著。西瓜三种不同倍性的净光合速率(Pn)值差异显著,Pn值为M3x>M2x>M4x。Pn值的日变化呈双峰曲线,峰值出现在上午10时和下午13时;第一峰值大于第二峰值。都存在光合“午休”现象,但3x的“午休”不同染色体倍性西瓜的遗传变异和抗逆机理研究现象不如4x和Zx明显。从影响因子可以看出,3x和2x胞间COZ浓度高,气孔阻力小,光合效率高;而M4x胞间COZ浓度低,M4x气孔密度小,气孔阻力大,光合效率低,光合“午休,’现象也较明显。 5 .NaCI胁迫对不同倍性西瓜生长发育及生理生化特性的影响:利用NaCI溶液浸渍法、NaCI琼脂固定法、砂培NaCI溶液浇灌法等试验分别研究不同倍性西瓜种子萌发、发芽种子成苗过程、幼苗期等不同生育时期的耐盐性:在30一gOInlnol·L一‘低浓度下,不同倍性西瓜的相对发芽率、发芽指数、活力指数、成苗率都比没有NaCI胁迫的高,倍性之间没有明显差异;在90 Ilunol·L一,以上浓度时,不同倍性之间有明显差异,种子萌发的耐盐性为M4x>M3x>MZx;成苗时期的耐盐性为M4x>MZx>M3x。幼苗期的耐盐性为M4x>M3x>MZx,M4x在不同Nacl浓度胁迫下的受害指数都比M3x和MZx小,MZx在400nunol/L NaCI浓度下植株几乎全部死亡。不同生育期的耐盐结果不同,但4x在任何时期的耐盐性都比3x和2x强。 对不同浓度NaCI胁迫后西瓜幼苗的细胞保护酶(S OD、POD)、可溶性蛋白质 (P RO)及膜脂过氧化产物MDA的变化研究结果表明:(1) NaCI胁迫后,M4x的SOD和POD活性变化和对照接近,一直增加;M3x和MZx的变化剧烈,低NaCI浓度下SOD和POD活性一直增加,高浓度下则表现为先升后降趋势;(2) M4x的MDA含量降低;M3x和MZx的MDA含量先降后升,随着胁迫时间、NaCI浓度的增加,MDA上升幅度更大;(3) M4x的可溶性蛋白质含量均接近或高于对照,M3x和MZx则先升后降,随着NaCI浓度的增加,胁迫时间延长,下降幅度增大。M4x的SOD和POD活性增加,PRO含量增加,MDA含量下降,是四倍体西瓜表现出耐盐的主要生理生化原因。 6.低温胁迫对不同倍性西瓜叶片膜脂过氧化及保护醉的影响:通过对蜜枚西瓜幼苗进行低温弱光处理(12℃,光强为IO001x,光/暗处理时间为14h/l oh)的试验结果表明,在没有冷诱导时M4x、M3x的耐冷性不如MZx。随着冷胁迫时间的延长,SOD、POD活性都有所增加,MZx比 M4x、M3x增加幅度大,但最后下降。MDA含量变化呈相反趋势。PRO含量变化MZx、M3x先上升,4天后下降,M4x的PRO含量从开始就表现下降。M4x不耐低温和四倍体叶片的叶肉细胞大和含水量高有关。MZx的SOD和POD活性增加幅度大,PRO降低缓慢,MDA增加缓慢是其耐低温的生理生化原因。 通过4天10℃的预冷