本研究是以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为试验对象,探究甘氨酸(Gly)对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡以及免疫应答的影响。试验分别测定了Gly培养乳腺上皮细胞后,细胞的增殖活性、细胞周期变化、细胞凋亡率以及四种免疫因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)的基因表达量,旨在阐明Gly是否参与奶牛乳腺上皮细胞的生长和免疫调节过程以及对乳腺上皮细胞免疫应答产生的影响。本论文的研究内容和结果如下：1、胶原酶消化法分离出奶牛乳腺上皮细胞,培养基中添加0、1、2、5、10和20mmol/L的Gly后在体外条件下培养细胞24、48和72h,用MTT法检测细胞增殖活性。结果表明,Gly对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性有低浓度(1mmol/L)促进,高浓度(10-20mmol/L)显著抑制的作用(P<0.05)。2、使用流式细胞仪技术,应用Annexin V-FITC/PI双染法检测不同浓度Gly(0、1、2、5、10和20mmol/L)培养后的奶牛乳腺上皮细胞周期,结果发现,Gly能够显著促进乳腺上皮细胞的细胞周期向S期和G2/M期转化(P<0.05),并促进细胞分裂。3、使用流式细胞仪技术,应用Annexin V-FITC/PI双染法检测不同浓度Gly(0、1、2、5、10和20mmol/L)培养后的奶牛乳腺上皮细胞的凋亡率,结果显示,Gly对乳腺上皮细胞凋亡具有促进作用(P<0.05),本试验中,Gly浓度为20mmol/L时细胞凋亡率最大。4、不同浓度Gly(0、1、2、5、10和20mmol/L)培养奶牛乳腺上皮细胞后,提取出总RNA,经反转录成cDNA后,采用Real-Time PCR法检测免疫因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的基因表达量,所得PCR产物用于琼脂糖凝胶电泳试验。结果表明,体外培养的奶牛乳腺上皮细胞具有分泌IL-1β、IL-6、IL-8、 TNF-α的能力,Gly可以显著上调这四种免疫因子的基因表达水平(P<0.05), Gly浓度为5mmol/L时,对这四种免疫因子基因表达水平的上调作用最强。