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目的:ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤病理表现与人体肝内胆汁淤积病变最为相似,也是研究胆汁淤积性肝病最常用的实验动物模型,但是关于ANIT引起的胆汁淤积性肝损伤的毒性分子机制报道确甚少。非诺贝特是过氧化物酶体增殖物活化受体alpha(Peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)的激动剂,也是最常用的贝特类的抗高血脂药物,近年来发现非诺贝特可对抗胆汁淤积性肝病,但是关于非诺贝特用于治疗胆汁淤积性肝损伤并没有并没有明确的临床用药指导,说明仍有重要的毒理学与药理学问题尚未解决。探究非诺贝特对抗胆汁淤积性肝病的作用与机制,对推动非诺贝特用于防治胆汁淤积性肝病有重要现实意义。方法:1、非诺贝特抗胆汁淤积性肝损伤的作用:野生型小鼠随机分为8组:阴性对照组(WTC)、胆汁淤积性肝损伤模型组(WT-A)、ANIT非诺贝特三个组(WT-A-F5、25、125)、非诺贝特剂量组(WT-F5、25、125)。非诺贝特和ANIT均溶于玉米溶剂中,灌胃给药非诺贝特5、25、125mg/kg每天2次,连续5天,在第4天的时候单剂量灌胃给予毒性药ANIT,48后经过量CO2麻醉处死小鼠后收集小鼠血液和肝脏。2、Ppara-null小鼠验证PPARα的作用:非诺贝特按照上述实验筛选发挥预保护作用的剂量,然后选用Ppara-null型小鼠验证PPARα的作用。Ppara-null型健康雄性小鼠随机分为4组:阴性对照组(KO-C)、胆汁淤积性肝损伤模型组(KO-A)、ANIT非诺贝特组(KO-A-F25)、非诺贝特剂量组(KO-F25)。非诺贝特和ANIT均溶于玉米溶剂中,灌胃给予非诺贝特25mg/kg每天2次,连续5天,在第4天的时候单剂量灌胃给予毒性药ANIT,48后经过量CO2麻醉处死小鼠后收集小鼠血液和肝脏。3、PPARα标准激动剂WY-14643的验证PPARα的作用:野生型小鼠随机分为4组:阴性对照组(WT-C)、胆汁淤积性肝损伤模型组(WT-A)、ANIT/WY-14643(WT-A-WY)、WY-14643组(WT-WY)。WT-A-WY和WY-14643组饲连续养0.1%的WY-14643饲料5天,在第4天WT-A和WT-A-WY组别单剂量给予ANIT 75mg/kg,48小时后量CO2麻醉处死小鼠后收集小鼠血液和肝脏。4、JNK炎症通路抑制剂SP600125的反向验证JNK的作用:野生型小鼠随机分为4组:阴性对照组(WT-C)、胆汁淤积性肝损伤模型组(WTA)、ANIT SP600125(WT-A-SP)、SP600125组(WT-SP)。WT-A-SP和SP600125组腹腔注射SP600125 15mg/kg,半小时后WT-A和WT-A-SP灌胃给予ANIT 75mg/kg,48小时后量CO2处死小鼠后收集小鼠血液和肝脏。5、非诺贝特高剂量组SP600125反向验证JNK的作用:为验证高剂量组的损伤来自于JNK炎症通路的不完全抑制,将野生型小鼠随机分为4组:阴性对照组(WT-C)、胆汁淤积性肝损伤模型组(WT-A)、ANIT/非诺贝特125mg/kg(WT-A-F125)、ANIT/非诺贝特/SP600125组(WT-A-F-SP)。灌胃给药非诺贝特125mg/kg每天2次,连续5天,在第4天的时候,WT-A-F-SP组腹腔注射SP600125 15mg/kg,半小时后WT-A和WT-A-F-SP灌胃给予ANIT75mg/kg,48小时后量CO2处死小鼠后收集小鼠血液和肝脏。结果:1、生化和组织学检查显示非诺贝特25 mg/kg一天两次可完全抑制ANIT诱导的胆汁淤积和肝脏损伤;2、这种保护作用仅发生在野生型小鼠中,在Ppara-null型小鼠中无上述保护作用。3、经过Q-PCR分析发现:胆酸合成和转运相关的基因多发生适应性的改变而非非诺贝特的直接调节;但是非诺贝特对Oapt1具有下调作用而对Mrp4具有上调作用,这对缓解ANIT引起的胆汁淤积具有缓解作用;蛋白免疫印迹分析发现:在所有发生胆汁淤积性肝损伤的组别中JNK炎症通路处于激活状态;并且非诺贝特对NF-κB、STAT3、JNK信号通路均有抑制作用。4、WY-14643可完全抑制ANIT诱导的胆汁淤积和肝损伤,同时抑制NF-κB、STAT3和JNK信号通路。5、JNK抑制剂SP600125能通过抑制JNK炎症通路强效抑制ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤。结论:JNK在ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤以及非诺贝特发挥抗ANIT引起的胆汁淤积性肝损伤中担任着非常重要的角色,总结为以下几个方面:(1)JNK介导了ANIT引起的胆汁淤积性肝损伤的炎症反应。(2)非诺贝特可发挥防止ANIT引起的胆汁淤积性肝损伤。(3)非诺贝特可以通过上调Mrp4下调Oatp1缓解胆汁酸的毒性负荷。(4)非诺贝特发挥防止ANIT引起的胆汁淤积性肝损伤主要是通过激活PPARα后抑制JNK炎症反应而完成效果,并且具有剂量依赖性。