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多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是发生在B细胞系统的恶性肿瘤,标准的化疗方案仅能使40-60%病人获得暂时缓解,中位生存期不超过3年。大剂量化疗联合造血干细胞移植使缓解率明显提高,除了极少数病例,最终难免复发。患者体内存在的微小残留病(MRD)是MM复发的根源,也是进一步提高生存率和治愈率的主要障碍。正因为如此,人们对免疫治疗寄予厚望。希望在放化疗基础上结合适当的免疫治疗有可能更彻底地控制和清除MRD,进而达到痊愈。我们以往构建了携带人B7-1、GM-CSF和p53三个基因的复制缺陷型重组腺病毒BB-102。在本研究中,我们旨在利用BB-102基因修饰瘤苗提供一个MM的个体化免疫治疗方案:以BB-102为载体,在体外将三个治疗基因导入肿瘤细胞制备瘤苗,经照射后自体接种,以期提高肿瘤细胞的免疫原性,激活体内免疫系统的抗肿瘤免疫反应,进而杀死残余的肿瘤细胞。 以往的研究发现:MM细胞的抗原性很弱,表面缺乏共刺激分子B7-1,而且APC成熟障碍,从而导致细胞免疫受抑制。我们的思路是以重组腺病毒BB-102感染MM细胞,介导3个目的基因瞬时表达。通过B7-1分子与CD8~+T细胞表面的CD28分子结合传递第二信号,协同第一信号诱导静止的CD8~+T细胞成为杀伤性T细胞。GM-CSF能够促进APC成熟,提高它呈递抗原的能力。p53和射线诱导肿瘤细胞凋亡,有文献表明凋亡小体比细胞碎片有更强的抗原性,从而进一步提高APC的抗原呈递水平。活化的APC通过经典抗原呈递途径激活辅助T细胞,或者通过交叉抗原呈递途径激活杀伤T细胞,从而发挥抗肿瘤效应。 体外实验中我们评测了BB-102对MM细胞增殖和凋亡的影响以及免疫原性增强作用。实验采用了3种MM细胞系Sko-007、U266和RPMI8226以及病人来源的原代MM细胞。首先以GFP为报告基因,检测了腺病毒载体对MM细胞系以及原代MM细胞的感染效率。在此基础上评价了BB-102及相关重组腺病毒(其中BB-102的基因组中以串联方式携带3个目的基因:B7-1、GM-CSF和p53;Ad-p53/B7-1、Ad-p53/GM-CSF、Ad-p53和Ad-GFP作为对照)在MM细胞的表达和生物学效应:采用FACS、ELISA和Western blot分别检测了BB-102介导的B7-1、GM-CSF和p53在MM细胞的表达;用MTT法以及Annexin Ⅴ标记分别检测了BB-102对MM细胞系的增殖抑制作用和诱导凋亡作用;混合淋巴细胞和