卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻技术是辅助生殖技术的重要组成部分,多种哺乳动物的卵母细胞体外冷冻培养技术已经逐渐成熟,但驴卵母细胞的冷冻及培养体系尚不完善。驴具有较高经济价值,但驴的繁育能力低下,驴的卵母细胞冻存的研究具有重要经济及学术价值。本研究对冻存与未冻存GV期、MⅠ期、MⅡ期驴卵母细胞进行进行甲基化测序,分析冻存与未冻存驴卵母细胞甲基化的变化情况。同时挖掘了影响卵母细胞发育相关基因及分析其表达变化,分析冻存对驴卵母细胞冷冻后成熟及发育的影响。研究结果如下:1.冻存GV期驴卵母细胞与未冻存GV期卵母细胞相比,冻存后甲基化程度明显明显高于未冻存GV期,这个时期差异最为显著(P<0.05,CpG甲基化百分比对比:37.5%VS 23.9%);冻存组MⅠ期卵母细胞与未冻存MⅠ期卵母细胞相比,冻存后甲基化水平高于未冻存组MⅠ期,差异显著(P<0.05,CpG甲基化百分比对比:30.3%VS 26.7%);冻存组MⅡ期卵母细胞与未冻存组MⅡ期卵母细胞相比,冻存后甲基化水平低于未冻存MⅡ期,差异显著(P<0.05,CpG甲基化百分比:23.5%VS 29.8%)。2.取 num.DMCs=l,num.CpGs=3,DMC.qvalue=0.01,选择出总体甲基化差异基因1269个,其中上调基因数目692个,下调基因577个。3.GFM1基因玻璃化冷冻后甲基化水平降低,不同发育阶段基因表达量有不同程度的升高(MⅡ期基因表达量:15.4862 VS 3.8498),MRPL15基因玻璃化冷冻后甲基化水平升高,不同发育阶段基因表达量显著下降(MⅡ期基因表达量:0.4076 VS 2499.73)。