大越豆芋花中α-葡萄糖苷酶活性抑制成分研究

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大越豆芋是一种具有预防高血压、高血脂,降低患癌症风险,清除自由基等功能的健康食品。目前研究大多集中在地下块根(块茎)。事实上,日本民间有饮用豆芋花茶稳定血糖、血脂的习惯,对其降血糖活性部位、有效成分及作用机理的研究却鲜有报道。α-葡萄糖苷酶抑制剂因能阻止寡糖水解为单糖,降低餐后高血糖,是一类有效的降糖药。本研究初步探索了筛选大越豆芋花中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的物质的方法,建立了体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对豆芋花粗提物进行成分分析和活性比较,筛选出α-葡萄糖苷酶抑制效果较好的成分并进行初步分离纯化。本文的主要内容有:采用水浴回流、乙醇浸提两种方法初步提取豆芋花中的活性成分,分别检测其α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性,发现醇提物的α-葡萄糖苷酶抑制活性强于水提物,前者的IC50值为2.04mg/mL,后者为5.64mg/mL;而抗氧化活性则相反。选择α-葡萄糖苷酶抑制活性较好的醇提物,采用有机溶剂萃取法对其水溶液进行分离,得到石油醚相、正丁醇相、乙酸乙酯相和水相四个分极组分,再次比较其抗氧化活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性。乙酸乙酯相中皂苷含量最高,为29.04%(占提取物),且显示了较好的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性,其DPPH、ABTS的IC50值,FRAP值及α-葡萄糖苷酶的IC50值分别为77.54μg/mL、14.42μg/mL、6676.28μmol/L及137.12μg/mL,其中活性最高的为皂苷成分。对乙酸乙酯相8种酚类物质(对香豆酸、异牡荆苷、牡荆苷、异荭草苷、荭草苷、咖啡酸、绿原酸、苜蓿素)的HPLC分析发现,乙酸乙酯相中含有绿原酸、咖啡酸、牡荆苷和异牡荆苷四种成分,且含量依次为0.5234、0.0212、0.0045和0.0185mg/g。用响应面法优化豆芋花皂苷的提取工艺。在单因素实验的基础上,考察液料比、提取时间和乙醇浓度对总皂苷含量的影响,通过三因素三水平的中心组合实验,建立回归模型,得到最佳提取工艺:液料比20:1,提取时间2h,乙醇浓度90%。在此条件下得到的总皂苷含量为7.18%,与预测值基本相符。为得到含量较高的豆芋花总皂苷,用大孔树脂吸附法纯化乙酸乙酯相,验证其活性。大孔树脂吸附的最佳工艺参数为:树脂类型D101,上样浓度2.0mg/mL,上样量60mL,吸附时间3h,解吸液乙醇体积分数80%,解吸液用量100mL,解吸液pH=7。此法制备的豆芋花总皂苷含量为69.26%,其抗氧化活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性相对于乙酸乙酯相有明显提高。本文从大越豆芋花中筛选出了对α-葡萄糖苷酶具有较好抑制作用的成分,为日后开发具有降糖作用的食品或药品提供了科学依据。
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