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七鳃鳗属于现存最古老的具有适应性免疫系统的无颌类脊椎动物之一,可作为研究适应性免疫系统进化的模式生物。目前七鳃鳗免疫系统的研究一直倾向于可变淋巴受体(variable lymphocyte receptor,VLR),而关于其细胞毒相关免疫分子的研究几乎一片空白。而本实验室在七鳃鳗免疫系统中发现了一种靶向性杀伤肿瘤细胞的蛋白,命名为七鳃鳗免疫蛋白(Lamprey Immune Protein,LIP)。本实验室证实,LIP对多种肿瘤细胞有靶向杀伤作用,但杀伤机制有待研究,LIP在七鳃鳗体内的角色也是悬而未决的谜题。本文建立了LIP真核过表达系统,探究了LIP在H293T细胞以及HeLa细胞内的功能。本文通过分子克隆技术构建了pIRES2-AcGFP1-Nuc-LIP(LIP与GFP独立非融合表达)和pEGFP-N1-LIP(LIP与GFP融合表达)表达载体,用脂质体法分别转染两种细胞,应用蛋白质免疫印迹法,实时荧光定量PCR,乳酸脱氢酶释放检测,细胞器染色,细胞凋亡以及活性氧水平检测,细胞周期分析,基因芯片,免疫荧光等方法验证真核重组LIP的表达及探究其功能。实验结果证实LIP在两种细胞中成功过表达;过表达LIP引起HeLa细胞LDH释放,线粒体断裂,内质网空泡化,PS外翻,ROS爆发,P53信号通路激活以及细胞周期G2M期阻滞的现象。以上现象在空载质粒转染细胞以及H293T细胞中均未发现。而对H293T细胞,过表达LIP主要激活了胞内IgA的产生通路。本文结果表明,真核重组LIP以多聚体形式定位于细胞质,仅在外界刺激的条件下向胞外分泌。其靶向杀伤HeLa细胞可能机制包括诱导细胞周期G2M期抑制等。本文首次探究了LIP靶向杀伤HeLa细胞的机制,并指出了LIP与七鳃鳗黏膜免疫系统的关系,为进一步研究LIP的生物学功能和开展生物治疗奠定了实验基础,同时也为七鳃鳗免疫系统的研究提供了新的视角。