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研究背景及目的:肝内胆管细胞癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma,ICC)是位于肝细胞癌之后的第二大原发性肝脏恶性肿瘤,约占原发性肝脏恶性肿瘤的10-15%。虽然ICC诊断及治疗方法发展迅猛,但是ICC患者的预后依然不良。导致ICC预后不良的最主要原因是肿瘤局部侵袭、血管、淋巴管转移以及较难进行根治性手术。因此,特异性标记物的发现对临床上早期诊断、早期治疗ICC和评估ICC生存预后具有重要意义。CHD1L(Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene)是从人肝癌细胞的染色体1q21区分离的致癌基因,其编码的蛋白由两个解旋酶区域、一个C端宏功能域、核定位序列和两个磷酸化位点组成。CHD1L属于SNF2-类家族,在DNA修复、维持染色体的稳态和转录调节中扮演重要作用。多项研究发现,CHD1L在肝癌、乳腺癌、胃癌等多种恶性实体瘤中呈过表达,且与肿瘤迁移和侵袭有关。但其在ICC的侵袭和转移中的作用尚不清楚。本课题目的是通过探讨CHD1L基因在ICC组织及其细胞系中的表达水平和CHD1L与患者临床病理因素和生存预后的关系,并通过干扰CHD1L的表达等方法探讨其对ICC细胞系RBE增殖、迁移和侵袭的作用。方法:1、应用免疫组化检测80例ICC组织和30例癌旁组织切片中CHD1L的表达情况,并分析CHD1L的表达与ICC患者临床病理因素及生存预后的关联。2、采用Western Blot和qRT-PCR法检测4种ICC细胞系(RBE、HCCC-9810、HUCCT1、QBC939)和正常肝内胆管细胞HIBEpic中CHD1L蛋白和mRNA的表达。3、构建干扰质粒CHD1L-RNAi,干扰ICC细胞系RBE中CHD1L的表达后,用Western Blot法检测CHD1L蛋白表达水平的变化;然后利用CCK-8法、平板克隆形成实验、细胞划痕、Transwell迁移和侵袭实验检测RBE增殖、迁移和侵袭的变化。4、统计学分析:应用SPSS19.0统计软件,计量资料采用(x±S)表示,合理运用配对t检验、卡方检验、生存分析及Cox回归分析等统计方法,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1、免疫组化检测了80例ICC组织和30例癌旁组织切片CHD1L的表达情况,发现CHD1L主要表达在细胞核内,和正常肝胆管组织相比,在癌组织中呈高表达;CHD1L表达与ICC患者的分化程度(P=0.011)、血管侵犯(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.008)和TNM分期(P=0.001)指标显著相关,差异具有显著性(p<0.05)。生存曲线分析表明CHD1L高表达的患者预后不良,且Cox单因素及多因素比例风险回归模型分析表明CHD1L是ICC患者独立的预后标志。2、与正常肝内胆管细胞HIBEpic相比,CHD1L蛋白和mRNA在ICC细胞中的表达均上调,尤其是在ICC细胞系RBE。3、转染干扰质粒CHD1L-RNAi,下调ICC细胞系RBE中CHD1L的表达后,ICC细胞系RBE的增殖、迁移和侵袭能力下降。结论:CHD1L促进ICC的发生、发展,并可以作为ICC分子靶向治疗的靶点和影响预后的重要指标。