m2型乙酰胆碱受体在豚鼠前庭毛细胞中的表达的实验研究

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[目的]已有的研究已经证实乙酰胆碱(acetylcholine ,ACh)是哺乳动物主要的内耳传出神经递质,在外周前庭系统中存在各种毒菌碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,mAChR)和烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)。目前的研究表明m1-m5型乙酰胆碱受体在哺乳动物前庭终器中均有表达,但这些受体在前庭组织中的细胞定位国内外尚无报道,本实验研究编码m2型乙酰胆碱受体(m2 muscarinic acetylcholine receptor, m2 mAChR)的mRNA在豚鼠前庭终器及II型前庭毛细胞(vestibular hair cell, VHC)中的表达。[方法] 1.从豚鼠内耳中分离出前庭组织并提取RNA ,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测编码m2 mAChR的mRNA是否在豚鼠前庭组织中有表达。2.从豚鼠前庭组织中分离出II型前庭毛细胞,在显微操作仪器下应用玻璃电极捕获单个II型前庭毛细胞,应用单细胞RT-PCR(single cell reverse transcription polymerase chain reaction, SC-RT-PCR)法检测编码m2 mAChR的mRNA是否在豚鼠II型前庭毛细胞中有表达,从而明确m2 mAChR在前庭组织中的细胞定位。[结果]在豚鼠前庭终器及II型前庭毛细胞中均可检测到编码m2 mAChR基因的mRNA的表达,经测序证实其与预计扩增的cDNA序列一致。[结论]本研究运用RT-PCR的方法成功的检测出编码m2 mAChR基因的mRNA在豚鼠前庭终器中的表达,并进一步运用单细胞RT-PCR的方法检测编码m2 mAChR的mRNA在豚鼠VHCs II中的表达,由此为m2 mAChR在豚鼠VHCs II中的存在提供证据,并证实m2 mAChR也可能在介导前庭毛细胞胆碱能传出过程中起到重要的作用,进而为前庭疾病机制阐明及前庭疾病的治疗提供理论基础。
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