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目的在建立Wistar大鼠移植性肝细胞癌模型前(预防性)、后(治疗性)单独/联合给予硒、β-胡萝卜素。观察二者对大鼠生理功能作用及影响肝癌发生、发展的影响作用,以期为防治肝癌提供新思路。方法1预防性阶段:在建立Wistar大鼠移植性肝细胞癌模型前,单独/联合每日定时根据体重给予硒、β-胡萝卜素4周:硒实验组(亚硒酸钠0.3mg/(kg·d)),β-胡萝卜素实验组(β-胡萝卜素10mg/(kg·d)),硒联合β-胡萝卜素实验组(亚硒酸钠0.3mg/(kg·d)+β-胡萝素10mg/(kg·d)),对照组(水0.3mg/(kg·d)+油10mg/(kg·d))。期间观察大鼠一般体征,每日记录摄食量,每48h称量记录体重,计算食物利用率。实验第30天,各组处死10只大鼠,采血,检测血生化、血清及肝组织抗氧化指标(T-SOD、GSH-Px、MDA);计算脏器系数;制备大鼠肝脏HE染色病理切片,观察肝脏病理结构变化。2剩余56只大鼠(14×4组)开腹建立Wistar大鼠Walker-256移植性肝细胞癌模型,观察大鼠行为体征一周。3建模后第八天,各实验组继续给予相应受试物。干预至有大鼠出现死亡时,处死全部大鼠,采血,检测血常规、血生化、血清及肝组织抗氧化指标(T-SOD、GSH-Px、MDA);计算脏器系数;制备大鼠肝脏HE染色病理切片,观察肝脏病理结构变化。并使用Western Blot检测肝脏组织Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果1预防性阶段1.1大鼠一般体征在预防性阶段,各组大鼠毛发正常,眼耳口鼻无异常分泌物,精神佳,行为活动正常。1.2体重、摄食量及食物利用率情况预防性阶段,各组大鼠体重均保持逐渐趋缓的增长。雌鼠第二周体重增长量Se组小于联合组和对照组(P<0.01)。各组大鼠同实验节点摄食量和食物利用率差异无统计学意义。1.3脏器系数雄鼠:肝脏脏器系数Se组大于β-C组(P<0.05),脾脏脏器系数Se组大于β-C组和联合组(P<0.01);雌鼠:肺脏脏器系数联合组大于对照组(P<0.05),卵巢脏器系数Se组大于联合组(P<0.05)。1.4血生化相关指标直接胆红素与间接胆红素的比值:β-C组小于对照组(P<0.05),β-C组小于Se组和联合组(P<0.01);球蛋白的值:β-C组和联合组均大于对照组(P<0.05);BUN的值:联合组小于β-C组(P<0.05);各组大鼠血糖血脂代谢指标差异无统计学意义。1.5血清及肝组织抗氧化指标1.5.1血清抗氧化指标各组大鼠血清抗氧化指标差异无统计学意义。1.5.2肝组织抗氧化指标组织T-SOD活力:Se组和联合组小于对照组(P<0.01),β-C组大于对照组(P<0.05),Se组小于联合组和β-C组,β-C组大于联合组(P<0.01);组织GSH-Px活力:Se组和联合组小于对照组(P<0.01),β-C组大于对照组(P<0.01),Se组和联合组小于β-C组(P<0.01);组织MDA含量:各组数据差异无统计学意义。1.6病理学变化预防性阶段各组大鼠肝组织结构正常。2移植性肝细胞癌模型建立接种大鼠均出现不同程度的精神萎靡、毛发蓬乱暗淡、进食量及体重减少等情况。每组抽取2只大鼠处死后解剖,均于肝脏附近发现肉眼可见瘤结节,移植性肝细胞癌大鼠模型建立成功。3治疗性干预阶段3.1大鼠一般体征大鼠基本情况同上,个别大鼠出现口鼻血样分泌物、腹部膨胀肿大、行动不便等情况。3.2体重、摄食量及食物利用率体重:雄鼠体重:第一周,β-C组和联合组大于对照组(P<0.01);第三周,Se组和β-C组大于对照组(P<0.05);第四周,Se组大于对照组和联合组(P<0.05);接种前后,β-C组体重减少量大于Se组、联合组和对照组。雌鼠体重:接种前后Se组体重减少量大于对照组(P<0.05)。进食量:接种雌鼠接种前Se组摄食量大于对照组和联合组(P<0.05)。食物利用率:接种大鼠食物利用率差异无统计学意义。3.3脏器系数雄鼠脏器系数:脾脏脏器系数β-C组小于联合组(P<0.05)。雌鼠脏器系数:肺脏脏器系数,联合组大于Se组、β-C组和对照组(P<0.01),Se组小于对照组(P<0.05);肝脏脏器系数,Se组和β-C组小于对照组(P<0.05),Se组和β-C组小于联合组(P<0.05);脾脏脏器系数,Se组小于β-C组(P<0.05);右肾脏器系数,Se组和联合组小于对照组(P<0.05)。3.4血常规和血生化3.4.1血常规相关指标大型血小板比率:联合组大于对照组(P<0.05),Se组小于联合组(P<0.05);白细胞相关指标:各组数据差异无统计学意义。3.4.2血生化相关指标TP的值:Se组小于对照组(P<0.01),Se组小于β-C组和联合组(P<0.05);GLO的值:Se组小于对照组(P<0.01),Se组小于β-C组和联合组(P<0.05);BUN的值:Se组大于β-C组(P<0.05);各组血糖血脂代谢指标差异无统计学意义。3.5血清及肝组织抗氧化指标3.5.1血清抗氧化指标各组大鼠血清抗氧化指标(T-SOD、GSH-Px、MDA)差异无统计学意义。3.5.2肝组织抗氧化指标组织T-SOD活力:Se组大于对照组(P<0.01),联合组大于对照组(P<0.05),β-C组大于Se组(P<0.01)、对照组(P<0.01)和联合组(P<0.05);组织GSH-Px活力:Se组、β-C组、联合组均大于对照组(P<0.01),联合组大于Se组和β-C组(P<0.01);组织MDA含量:Se组大于对照组、β-C组和联合组(P<0.01),β-C组大于对照组(P<0.01)和联合组(P<0.05)。3.6病理学变化接种后大鼠肝脏出现病理性结构损伤。3.7肝组织蛋白表达情况Bcl-2蛋白表达:Se组大于对照组(P<0.05)和联合组(P<0.01),联合组小于对照组(P<0.05)和β-C组(P<0.01)。Bax蛋白表达:β-C组和联合组大于Se组(P<0.05)。Bcl-2/Bax比值:联合组小于对照组、Se组和β-C组(P<0.01),β-C组和联合组小于对照组(P<0.01),Se组大于对照组、联合组和β-C组(P<0.01)。结论1.预防性阶段,各组大鼠生长发育良好,硒、β-胡萝卜素摄入对大鼠正常生长发育不会造成不良影响,亦不对大鼠造成有害刺激或氧化损伤,且β-胡萝卜素实验组可以提高大鼠肝脏的抗氧化水平。2.本实验通过开腹建立Wistar大鼠Walker-256移植性肝细胞癌模型是可行的。建立移植性肝细胞癌模型后,大鼠受到肿瘤细胞的侵袭作用,机体出现一系列病症反应,相应的诸多机体功能亦出现紊乱变化。3.预防和治疗性给予大鼠适量的硒、β-胡萝卜素可提高机体的抗氧化能力,二者联合可以降低肝脏组织Bcl-2蛋白的表达,提高Bax蛋白的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,有利于防治肝癌的发生、发展。提示硒、β-胡萝卜素联合应用在肝细胞癌的防治方面有积极的作用,作为一种新思路,有进一步继续研究的价值及意义。4.硒影响机体生理功能及防治肝癌方面表现出双向的生物调节作用,其安全剂量、应用途径有待进一步探讨。