背景前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一,发病率居世界第五位,在男性中居第二位。2010年,美国新增前列腺癌患者217,730例,死亡32,050例。尽管亚洲男性前列腺癌的发病率低于非洲和美洲,但近年来,中国男性前列腺癌的发病率呈明显上升趋势。因此探索前列腺癌防治新策略,是应对当前前列腺癌发病率升高的当务之急。早期前列腺癌依赖于雄激素生长,雄激素去势治疗(androgen-deprivation therapy, ADT)是早期前列腺癌广泛采取的标准初始治疗方式,但几乎前列腺癌都会由早期的激素依赖性转变为激素非依赖性,并最终转变为激素难治性,明确前列腺癌发生发展及耐药机制将有利于治疗策略开发,但目前前列腺癌的发生发展机制尚未阐明。国内外学者对此进行了大量研究,目前焦点集中于前列腺癌细胞的抗凋亡机制。研究指出前列腺癌细胞能够以一种高效复合的机制逃避细胞凋亡,无限增殖。而X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是新近发现的凋亡促进因子,XIAP通过与caspases结合并抑制caspases的功能进而抑制细胞凋亡,XAF1能够拮抗XIAP的这种作用从而促进细胞凋亡。XAF1在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。研究表明,XAF1使肿瘤细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL),肿瘤坏死因子a (TNF-a)、干扰素p (IFN-p)等敏感性升高,并与上述因子联合作用使肿瘤细胞生长受抑制,因此,XAF1参与肿瘤细胞凋亡过程,并发挥重要作用。XAF1在多种肿瘤组织中低表达,如胃癌、结肠直肠癌、膀胱上皮癌、恶性黑色素瘤、肾透明细胞癌、小细胞肺癌、膀胱癌、和B型慢性淋巴细胞性白血病等,然而,XAF1在前列腺癌中的表达及意义少见报道。阐明XAF1在前列腺癌中的表达状况及其在前列腺癌发生发展过程中的作用,将能够为前列腺癌防治新策略提供数据支持及理论依据。本实验研究中,临床收集20例原发前列腺癌患者的癌组织以及与癌组织邻近的正常前列腺组织作比较,通过RT-PCR和Western blot方法检测收集的组织标本中XAF1 mRNA和蛋白的表达情况；于医院病理科获取49例前列腺增生患者和26例原发前列腺癌患者的组织切片,通过免疫组织化学方法观察组织切片中XAF1的蛋白表达情况,以此探讨凋亡促进因子XAF1对前列腺癌发生发展可能产生的影响,为以XAF1为靶基因的前列腺癌防治提供一定的理论依据。目的观察凋亡促进因子XAF1在前列腺癌中的表达,探讨其在前列腺癌发生发展过程中的作用及意义,为以XAF1为靶基因的前列腺癌治疗提供理论依据及数据支持。方法1.经山东大学齐鲁医院伦理委员会批准,临床收集20例原发前列腺癌患者的癌组织及与癌组织邻近的正常前列腺组织,分装于经高温高压灭菌后的EP管中,-80℃冰箱冻存备用。2.于山东大学齐鲁医院病理科收集49例前列腺增生患者和26例原发前列腺癌患者的蜡块。3.将前列腺癌组织和与癌组织邻近的正常前列腺组织作比较,通过RT-PCR和Western bolt方法,检测20例原发前列腺癌患者的癌组织以及与癌组织邻近的正常前列腺组织中XAF1 mRNA和蛋白的表达。4.将前列腺增生与前列腺癌作比较,通过免疫组织化学方法,观察49例前列腺增生患者和26例原发前列腺癌患者组织切片中XAF1蛋白表达。结果1.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测分析通过RT-PCR方法检测,发现在20例原发前列腺癌患者中有18例XAF1 mRNA在癌组织中的表达水平远低于其在与癌组织邻近的正常前列腺组织中的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)；另有1例XAF1 mRNA在两种组织标本中的表达水平相当,1例XAF1 mRNA在癌组织中的表达水平略高于其在与癌组织邻近的正常前列腺组织中。2.蛋白印迹(Western bolt)检测分析通过Western bolt方法检测,发现在20例原发前列腺癌患者中有16列XAF1蛋白在癌组织中的表达水平远低于其在与癌组织邻近的正常前列腺组织中的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)；另有2例XAF1蛋白在两种组织中的表达水平相当,2例XAF1蛋白在癌组织中的表达水平略高于其在与癌组织邻近的正常前列腺组织。3.免疫组织化学(Immunohistochemistry)检测分析对49例前列腺增生患者和26例原发前列腺癌患者的组织切片进行XAF1特异性染色。结果发现,49例前列腺增生患者中有45例患者的组织切片存在XAF1细胞浆染色的强表达和细胞核染色的弱表达；但在26例原发前列腺癌患者中有23例患者的组织切片XAF1在细胞浆和细胞核中均未见明显表达,表达均为阴性。结论前列腺癌中凋亡促进因子XAF1 mRNA和蛋白两个水平均低表达,推测其与前列腺癌发生发展紧密相关,是一个潜在的前列腺癌治疗靶点。背景前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一,发病率居世界第五位,在男性中居第二位。近年来,在发展中国家,尤其是中国,前列腺癌的发病率呈明显上升趋势。关于前列腺癌的发生发展机制及治疗新策略探索成为学术界关注的焦点,早期前列腺癌的生长依赖于雄激素,雄激素去势治疗(androgen-deprivation therapy, ADT)是目前早期前列腺癌广泛采取的标准初始治疗方式,其通过促黄体生成素释放激素或双侧睾丸切除来实现。雄激素去势治疗可以去除雄激素对细胞的刺激,诱导前列腺癌细胞凋亡,15-20个月后,激素依赖性前列腺癌会悄然转变为激素非依赖性前列腺癌,并最终发展为激素难治性前列腺癌。激素难治性前列腺癌是一种临床医源性疾病,其典型特征为前列腺癌细胞持续的增殖生长与雄激素的浓度无显著联系。目前激素难治性前列腺癌不能治愈,且预后不佳,其治疗方法多以化疗为主,但其毒副作用较大,病人所受痛苦较大,因此,亟需探索新的治疗策略。生长抑素是一种神经多肽,含有14个氨基酸,它在人体包括前列腺在内的多个组织器官均有分布。奥曲肽是一种八肽生长抑素类似物,自从二十世纪八十年代被证实可以减轻类癌瘤综合症以来,奥曲肽已经被广泛应用于临床。研究指出,生长抑素可以通过影响肿瘤细胞的增殖、凋亡和血管生成等发挥其对抗肿瘤的作用。我们以前的研究亦指出,生长抑素可以作用于前列腺癌LNCaP和DU145细胞而促进细胞凋亡,但具体机制尚不清楚。研究发现,前列腺癌在发生发展过程中存在某些致癌基因和抑癌基因的表达异常,所以,近来前列腺癌基因治疗越来越受到人们的关注。前列腺癌基因治疗是将抑癌基因转移至前列腺癌肿瘤细胞内进行表达,从而达到抑制肿瘤细胞生长的目的。然而,进行前列腺癌基因治疗首先要寻找到可用于治疗的靶基因,凋亡促进因子XAF1越来越引起重视。前期研究发现凋亡促进因子XAF1在前列腺癌中低表达,XAF1有可能成为前列腺癌基因治疗的一个靶基因。近来,有研究者在实验裸鼠体内进行胃肠肿瘤造模后,应用XAF1重组腺病毒进行治疗,胃肠肿瘤的生长受到显著抑制,当XAF1重组腺病毒与TRAIL联合治疗时,实验裸鼠的移植瘤完全消退。这提示XAF1与肿瘤的发生发展及治疗密切相关,XAF1可能是前列腺癌治疗的潜在新靶点,研究发现诱导XAF1的高表达可以导致肿瘤细胞发生凋亡,但是其调控机制尚待阐明。有人曾提出,全反式维甲酸可以通过增强XAF1启动子活性上调XAF1表达,而关于其他药物,如生长抑素与XAF1的关系及调控尚未见报道,前列腺癌中生长抑素是否调控XAF1表达及通过XAF1发挥其治疗作用尚不清楚。本研究,应用RT-PCR和Western blot方法,检测人体正常前列腺上皮细胞株RWPE-1和前列腺癌细胞株LNCaP、DU145及PC3中凋亡促进因子XAF1 mRNA和蛋白的表达；通过免疫细胞化学方法,观察人体正常前列腺上皮细胞株RWPE-1和前列腺癌细胞株LNCaP、DU145及PC3中XAF1的染色情况。此后,用生长抑素及其类似物奥曲肽各1nM分别刺激前列腺癌细胞株LNCaP、DU145及PC3不同的时间,再次通过RT-PCR和Western blot方法,检测刺激前后前列腺癌细胞中XAF1 mRNA和蛋白的表达。以此探讨生长抑素及其类似物对XAF1 mRNA和蛋白的调节,为深入研究以XAF1为靶基因的前列腺癌防治奠定基础,也可能为前列腺癌的防治提供新思路和新方法。目的探讨生长抑素及其类似物奥曲肽对前列腺癌细胞中凋亡促进因子XAF1的调节作用及可能作用机制,为深入研究以XAF1为靶基因的前列腺癌防治奠定基础。方法自美国ATCC公司购买前列腺细胞株RWPE-1、LNCaP、DU145和PC3。其中,人体正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)与前列腺癌细胞(LNCaP、DU145和PC3)作比较,通过RT-PCR和Western bolt方法,检测人正常前列腺上皮细胞与前列腺癌细胞之间凋亡促进因子XAF1 mRNA和蛋白的表达差异。通过免疫细胞化学方法,观察XAF1在正常前列腺上皮细胞与前列腺癌细胞之间的表达差异。再分别用生长抑素和其类似物奥曲肽各InM连续刺激前列腺癌细胞不同的时间(0、1h、12h、24h、72h),通过RT-PCR和Western bolt方法检测刺激前后前列腺癌细胞中XAF1 mRNA和蛋白的表达差异。结果1.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测分析通过RT-PCR方法检测,发现XAF1 mRNA在人体正常前列腺上皮细胞株RWPE-1中的表达远高于其在前列腺癌细胞株LNCaP、DU145和PC3中的表达,正常前列腺细胞(RWPE-1)与前列腺癌细胞(LNCaP、DU145和PC3)相比,XAF1 mRNA在其中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。使用生长抑素和奥曲肽各1nM分别刺激前列腺癌细胞株LNCaP、DU145和PC3不同时间(0, 1h, 12h,24h,72h)后,发现,生长抑素和奥曲肽均上调三种前列腺癌细胞株中XAF1 mRNA的表达。其中,与ctrl相比,生长抑素和奥曲肽在1h时间点上调不显著,上调无统计学意义(P>0.05),在其余时间点均显著上调,上调具有统计学意义(P<0.05)。2.免疫印迹(WB)检测分析通过Western bolt方法检测,发现XAF1蛋白在人体正常前列腺上皮细胞株RWPE-1中的表达远高于其在前列腺癌细胞株LNCaP,DU145和PC3中的表达,正常前列腺细胞(RWPE-1)与前列腺癌细胞(LNCaP、DU145和PC3)相比,XAF1蛋白在其中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。使用生长抑素和奥曲肽各1nM分别刺激前列腺癌细胞株LNCaP、DU145和PC3不同时间(0, 1h,12h, 24h,72h)后,发现,生长抑素和奥曲肽均上调三种前列腺癌细胞株中XAF1蛋白的表达。其中,与Ctrl相比,生长抑素和奥曲肽在1h时间点上调不显著,上调无统计学意义(P>0.05),在其余时间点均显著上调,上调具有统计学意义(P<0.05)。3.免疫细胞化学染色(ICC)检测分析通过免疫细胞化学方法,对人体正常前列腺上皮细胞株RWPE-1和三种前列腺癌细胞株LNCaP、DU145及PC3进行XAF1特异性染色。结果发现,XAF1在人体正常前列腺上皮细胞株RWPE-1的细胞浆和细胞核中均着色,主要表达于细胞核；XAF1在前列腺癌细胞株LNCaP、DU145及PC3中未检测到明显着色,表达为阴性。结论生长抑素及其类似物奥曲肽可诱导前列腺癌细胞中凋亡促进因子XAF1 mRNA和蛋白的高表达,这一发现为继续研究XAF1在前列腺癌基因治疗中的靶基因作用奠定坚实基础,也可能为前列腺癌的防治提供新思路和新方法。