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目的与背景:EFNA4是受体酪氨酸激酶家族中的一员,其参与胶质母细胞瘤、胰腺癌和淋巴瘤等多种肿瘤的发生和发展。然而EFNA4在骨肉瘤中的作用尚不明确。因此本文通过对比骨肉瘤组织和正常组织及人成骨细胞（h FOB1.19）和人骨肉瘤细胞（U2OS）中EFNA4的表达情况,并探索了EFNA4对U2OS细胞的增殖、迁移、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及凋亡的影响,最后对其分子机制进行了进一步探索。方法:首先收集三例骨肉瘤组织（术前未经放疗和化疗）和正常骨组织,培养h FOB1.19和U2OS细胞,并利用蛋白印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR）测定骨肉瘤组织和正常组织、h FOB1.19细胞和U2OS细胞中EFNA4蛋白和m RNA的表达情况。然后用慢病毒敲减U2OS细胞中的EFNA4,并分成Sh EFNA4（实验组:转染Sh EFNA4）组、Sh Ctrl（阴性对照组:转染无序Sh RNA）组、Control（空白组:不干预）组进行后续实验。利用Western blot、细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）、划痕实验、Hoechst染色探索敲减EFNA4后对U2OS细胞的增殖、迁移、EMT和凋亡的影响。并利用Western blot分析敲减EFNA4对PI3K/AKT通路相关蛋白的影响,最后用LY294002（PI3K/AKT信号通路抑制剂）处理Sh EFNA4组的细胞,探索抑制该通路是否能进一步增强敲减EFNA4对U2OS细胞的影响,从而证明EFNA4和PI3K/AKT通路的关系。结果:Western blot和q RT-PCR结果显示,骨肉瘤组织和U2OS细胞中的EFNA4蛋白和m RNA表达水平都显著高于正常组织和h FOB1.19细胞（p＜0.05）。Western blot结果显示Sh EFNA4组中EFNA4的蛋白表达水平显著低于Sh Ctrl组和Control组（p＜0.05）,而Sh Ctrl组和Control组之间的表达差异无统计学意义（p＞0.05）。Western blot和CCK-8结果显示Sh EFNA4组的增殖相关蛋白（PCNA、CDK4、cyclin D1和Ki67）的表达和吸光度值（OD值）都显著低于Sh Ctrl组和Control组（p＜0.05）。Western blot显示Sh EFNA4组的迁移相关蛋白（MMP2和MMP9）、EMT相关蛋白（E-cadherin和N-cadherin）的表达明显低于Sh Ctrl和Control组（p＜0.05）;而且细胞划痕实验结果显示,Sh EFNA4组的伤口愈合速度明显慢于Sh Ctrl组和Control组;Hoechst染色的结果显示与Sh Ctrl组和Control组相比,Sh EFNA4组的凋亡细胞数和细胞调亡率明显更高（p＜0.05）;Western blot结果与Hoechst染色结果相同,即Sh EFNA4组的促凋亡蛋白（Bax、Caspase3和Caspase9）的表达水平高于Sh Ctrl组和Control组,而抗凋亡蛋白（Bcl-2）的表达水平则相反,且有统计学意义（p＜0.05）。此外,Sh EFNA4组的p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT也低于Sh Ctrl组和Control组（p＜0.05）。当用LY294002处理Sh EFNA4组细胞后,与未被LY294002处理的Sh EFNA4组细胞相比,处理后的U2OS细胞的增殖、迁移和EMT被抑制得更加明显,而凋亡水平则更高（p＜0.05）。结论:EFNA4在骨肉瘤中被异常上调;敲减EFNA4能显著抑制U2OS细胞的增殖、迁移和EMT,并且能促进骨肉瘤细胞的凋亡;EFNA4对U2OS细胞上述生物过程产生影响是通过抑制PI3K/AKT信号通路实现的。