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目的:探讨β-arrestin1和β-arrestin2在白血病患者中的表达及意义。方法:收集初发白血病患者95例(Leu组),根据白血病不同亚型分为:急性髓细胞白血病(AML)组(30例),急性淋巴细胞白血病(ALL)组(44例)和慢性粒细胞白血病(CML)组(21例);以非恶性血液病患者36例(NL组)作为正常对照。收集患者的骨髓和外周血标本,分离单个核细胞。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测β-arrestin1和β-arrestin2的mRNA表达,采用Western blot和免疫荧光法检测β-arrestin1和β-arrestin2的蛋白表达。结果:Leu组和NL组的骨髓和外周血单个核细胞中,均检测到β-arrestin1和β-arrestin2 mRNA和蛋白的表达,Leu组显著高于NL组(P<0.01)。与NL组比较,AML、ALL和CML各组的骨髓和外周血中β-arrestin1和β-arrestin2的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),但三个组间无显著差异(P>0.05)。结论:白血病患者骨髓和外周血单个核细胞中β-arrestin1和β-arrestin2的表达明显升高,提示它们可能与白血病的发生、发展密切相关。目的:包装与纯化β-arrestins过表达和抑制性慢病毒载体,感染白血病K562细胞后筛选其稳定表达株。方法:采用质粒共转染293T细胞包装重组慢病毒,病毒液进行梯度稀释后感染293T细胞;感染K562细胞后,用荧光定量RT-PCR和Western blot方法检测β-arrestin1(βArr1)和β-arrestin2(βArr2)的mRNA和蛋白表达水平,确定慢病毒的感染效果;采用有限稀释法筛选β-arrestin1过表达和抑制的稳定表达株。结果:分别共转染构建慢病毒载体的3个包装质粒入293T细胞后48h,荧光显微镜下可见明显的绿色荧光表达,其滴度分别为LV-EV , 2.21×107 pfu/ml; LV-β-Arr1, 1.17×107 pfu /ml; LV-Siβ-Arr1,1.96×107 pfu /ml;LV-β-Arr2,1.37×107 pfu /ml;LV-Siβ-Arr2,1.64×107 pfu /ml。重组慢病毒感染K562细胞后,LV- EV空载组β- arrestin 1和β-arrestin2的mRNA和蛋白表达水平无明显改变;LV-βArr1组β- arrestin 1 mRNA和蛋白表达水平显著升高;LV-siβArr1组β- arrestin 1 mRNA和蛋白表达水平显著降低;LV-βArr2组β- arrestin 2 mRNA和蛋白表达水平显著升高;LV-siβArr2组β- arrestin 2 mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论:成功包装慢病毒LV-βArr1、LV-siβArr1、LV-βArr2、LV-siβArr2及LV-EV对照病毒载体。能够高效感染K562细胞,并介导相应基因的高表达或抑制。第三部分慢病毒介导的β-arrestin1影响K562细胞增殖的实验研究目的:观察慢病毒介导的β-arrestin1对白血病细胞K562增殖及凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:选用筛选出的K562-EV、K562及K562-siβArr1细胞,荧光定量RT-PCR及Western blot方法检测β-arrestin 1 mRNA和蛋白表达水平。利用MTT比色法检测K562细胞增殖状态的变化。荧光定量RT-PCR检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA的表达。结果:K562-βArr1细胞βArr1 mRNA和蛋白质表达水平均显著高于空载组和对照组(P<0.01);K562-siβArr1细胞βArr1 mRNA和蛋白质表达水平均显著低于空载组和对照组(P<0.01)。与正常K562对照细胞相比,K562-βArr1细胞的增殖速度明显加快,而K562-SiβArr1细胞的增殖速度明显减慢,K562-EV细胞的增殖速度无显著改变。与对照组和空载组比较,K562-βArr1组MMP-9 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),LV-siβArr1组MMP-9 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),而对照组和空载组之间的表达无统计学意义;MMP-2、Bax及Bcl-2的mRNA表达水平在各组间均无显著差异。结论:β-arrestin1基因能够促进了K562细胞的增殖,可能与改变MMP-9的表达而改变其微环境有关。