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马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)对集约化养猪业的发展危害严重，同时对养猪业的相关从业人员的健康具有潜在威胁。马链球菌兽疫亚种的类M蛋白是一种重要的表面蛋白和毒力因子，具有调理素功能，且能够抵抗抗体的吞噬细胞对其的吞噬作用。本试验在分子水平上对马链球菌兽疫亚种类M蛋白的粘附机制进行了研究，为该菌的致病机制及引起的猪链球菌病的防控进行了有益的探索。 根据已发表的马链球菌兽疫亚种猪源ATCC35246株的类M蛋白基因序列，设计和合成一对引物，并以ATCC35246株的基因组DNA为模板，通过PCR技术，扩增出去掉信号肽的类M蛋白基因并定向克隆至表达载体pET-32a(+)中。重组质粒通过酶切鉴定和测序后，将重组质粒转化入大肠杆菌BL21进行原核表达，SDS-PAGE显示表达产物约60kD，Western blot显示，其与ATCC35246株多克隆抗血清反应，抗原性良好。 以His亲和层析拄纯化重组的类M蛋白作为抗原免疫6-8周龄的BALB／c小鼠，三次免疫后，取脾细胞并与对数期生长良好的SP2／0细胞进行融合，应用灭活的ATCC35246菌液为包被抗原，建立间接ELISA筛选阳性克隆，经过3次亚克隆之后得到12株稳定分泌抗类M蛋白单抗的细胞株，特异性检测显示其与猪链球菌2型等没有交叉反应。以BABL／c小鼠制备的腹水单抗，ELISA效价约为1:10000。 采用通用的模式细胞HEp-2细胞，研究马链球菌兽疫亚种ATCC35246株类M蛋白的粘附作用。结果显示，ATCC35246株可以粘附HEp-2细胞，它可以粘附细胞。用重组的类M蛋白预处理HEp-2细胞，当类M蛋白的量达到160μg／500μL，可以完全抑制细胞对细菌的粘附；用重组表达的类M蛋白鼠单抗血清处理ATCC35246，可抑制其对HEp-2细胞的粘附，在1:200倍稀释时即能完全抑制它对HEp-2细胞的粘附；而ATCC35246的全菌鼠抗血清在1:200时能完全抑制它对HEp-2细胞的粘附。同时，以12株单抗处理细菌以后，发现单抗2C8具有明显抑制细胞粘附的作用，说明2C8对应的抗原表位在细胞粘附中具有决定性作用。 以类M蛋白的单抗细胞株2C8分泌的单抗作为靶分子，研究其对应的抗原表位。用从前以试验得到的2C8单抗包被酶标条孔，从12肽随机肽库中经过5轮生物淘洗(结合、淘洗及富集)程序进行筛选，第2轮以后降低2C8的包被浓度，同时升高洗