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目的苓甘五味姜辛汤是我国中医经典《金匮要略》中的名方,经古今医家实践证明,对寒饮型慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructivepulmonary disease以下简称COPD)具有独特的疗效。该方药仅五味,而配伍精当,组方严谨,散收结合,标本同治,疗效显著。本实验旨在观察苓甘五味姜辛汤对寒饮型COPD大鼠作用及其机理,并为开发苓甘五味姜辛汤作为化饮止咳成方提供实验依据。方法本实验采用现代医学和中医学病因病理造模的方法,在模拟COPD寒饮蕴肺证病因和临床表现的基础上,用烟熏和冷水浴的方法建立COPD寒饮蕴肺证大鼠模型,用苓甘五味姜辛汤对上述病症进行干预,并通过客观指标对其进行评价和验证。在上述动物模型验证成功的基础上,观察苓甘五味姜辛汤对寒饮型COPD气道炎症介质表达的调控作用,具体方法如下:1.模型制作及取材:将实验大鼠饲养于室温12℃左右的环境中,饮用水为纯净冰水混合物,饲料为全营养有机饲料。造模时间从3月份开始,将模型组、治疗组和中西药物对照组大鼠置于烟熏箱内,以香烟16支烟熏,一次一小时,一天两次(上午、下午各一次),下午烟熏1小时后对大鼠进行冷水浴30min(水温10～12℃),持续20天,然后从第21天起每天烟熏2次持续10天,不做冷水浴,总共造模一月。空白对照组养于正常无烟环境中,不做任何处理。第31天,对治疗组大鼠灌服苓甘五味姜辛汤水提剂(按大、中、小剂量,1ml/100g体重)3周。同时,中药对照组灌服小青龙颗粒悬浊液(1ml/100g体重),西药对照组灌服盐酸氨溴索片悬浊液(1ml/100g体重),模型组灌服生理盐水(1ml/100g体重)。治疗灌药结束后第2天,大鼠摘眼球取血4ml,冰浴,在4℃下3500r/min,离心15min,取上清液-20℃保存;取左肺中下叶肺组织300mg,加PBSlml(PH7.4),冰浴。以无菌手术剪将肺组织剪碎,冰浴匀浆,在4℃下4000r/min,离心15min,取上清液-20℃保存,以放免法检测IL-8含量;取左侧肺脏中上部组织0.5cm×0.5cm,用10%甲醛溶液固定,组织切片用HE染色,光镜下观察肺与支气管的组织形态变化;取各组大鼠右肺中叶距肺门1/3处矢状面横贯取材,在4℃生理盐水中漂洗干净,立即投入含有0.1%DEPC水处理的4%甲醛溶液中固定,用超薄切处机切成5um厚的切片。贴于涂有10%多聚赖氨酸的载玻片上,用于MMP-9、TIMP-1及ICAM-1蛋白的检测。2.炎症介质观察:光学显微镜下观察COPD大鼠支气管和肺组织形态学的改变,并附以照片说明;运用放射免疫法观察苓甘五味姜辛汤对COPD大鼠外周血及肺组织匀浆液中IL-8表达水平的影响;运用免疫组化法观察苓甘五味姜辛汤对COPD大鼠肺组织中MMP-9、TIMP-1、ICAM-1表达水平的影响。通过与小青龙颗粒、盐酸氨溴索作对照,观察高、中、低剂量苓甘五味姜辛汤对COPD大鼠血清、肺组织IL-8、MMP-9、TIMP-1、ICAM-1炎症介质的影响,从炎症介质角度,探讨苓甘五味姜辛汤对COPD的治疗作用机理。结果1.模型评价:通过病理切片对苓甘五味姜辛汤、小青龙颗粒组及盐酸氨溴索组与模型组大鼠支气管和肺组织切片的观察对比,发现苓甘五味姜辛汤能明显改善炎性因子对大鼠支气管和肺组织的伤害,并能促进坏死组织进行重构,恢复组织结构,大剂量组尤其明显。2.苓甘五味姜辛汤治疗COPD的机理:①苓甘大组、苓甘中组、小青龙颗粒组、盐酸氨溴索组与模型组比较IL-8明显下降,P＜0.05有统计学意义;苓甘大、苓甘中组、小青龙颗粒组、盐酸氨溴索组之间无明显差异,P＞0.05,无统计学意义。苓甘大、中组与苓甘小组比较P＜0.05,有统计学意义。②苓甘大组、苓甘中组、小青龙颗粒组、盐酸氨溴索组与模型组比较MMP-9降低,TIMP-1降低,ICAM-1降低明显,P＜0.05,有统计学意义;苓甘大、苓甘中组、小青龙颗粒组、盐酸氨溴索组之间无明显差异,P＞0.05,无统计学意义。苓甘大、中组与苓甘小组比较P＜0.05,有统计学意义。结论1.通过被动吸烟和冷水浴相结合构建的大鼠COPD模型,能成功复制出寒饮蕴肺型COPD大鼠模型。2.苓甘五味姜辛汤通过抑制慢支大鼠支气管和肺组织中MMP-9的升高,调节TIMP-1水平,调节MMP-9/TIMP-1的比值,抑制COPD大鼠气道炎症,改善气道阻塞;降低COPD大鼠外周血IL-8的水平;抑制COPD大鼠支气管和肺组织中ICAM-1的升高,干预COPD气道炎症反应,实现其治疗寒饮蕴肺型COPD的作用。