荔枝果实衰老过程中miRNA及其靶基因的分离鉴定

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荔枝具有鲜艳的色泽和丰富的营养,因而其经济价值颇高。然而,采后1-2天内口感即开始恶化并发生果皮褐变。导致荔枝果实采后衰老的因素复杂多样。microRNAs作为一种重要的负调控因子几乎参与植物的每一个生理过程。为了从miRNA水平探究采后荔枝果实衰老及果皮褐变的分子机制,构建了常温贮藏0d、4d以及低温贮藏14d常温货架期0h、24 h和48h5个不同贮藏时期的小RNA文库和一个混合样品的降解组文库,并对它们进行高通量测序。  通过将测序所得到的小RNA读段与荔枝的非重复序列基因匹配,首次在荔枝中找到了296条保守miRNAs,它们分属49个miRNA家族。同时,找到11条荔枝特有的miRNAs。经降解组测序和分析,鉴定到167条保守miRNAs的197个靶基因和3条荔枝特有miRNAs的5个靶基因。运用RLM-5-RACE技术,对9条靶基因进行了靶切位点的验证,其中的6条靶基因得到验证。最后,通过茎环法实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-P CR)和转录组文库的数据分析,鉴定出14对miRNA-靶基因参与包括能量调控、花色素苷代谢、激素信号传递以及病原菌侵染的防御等荔枝衰老相关过程。  根据上述信息,提出了miRNA-靶基因参与荔枝衰老过程的调控网络,该网络揭示了miRNA介导的采后荔枝果实衰老的调控途径,这也为延缓荔枝果实以及其他园艺产品的衰老提供了新途径。
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