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目的:人脂肪干细胞(Human adipose derived stem/stromal cells,hASCs)是骨组织工程中常用的种子细胞,在体内和体外都具有良好的成骨特性。肿瘤蛋白p53诱导的核蛋白2(Tumor protein p53-induced nuclear protein 2,TP53INP2)与细胞自噬、糖尿病、肿瘤的发生发展、肥胖的调节及成脂分化的调控等密切相关。然而,TP53INP2对hASCs成骨分化的调节作用尚不清楚。因此,本课题旨在探索TP53INP2在hASCs成骨分化过程中的作用及其相关机制。方法:体外分离、培养并鉴定hASCs,同时检测其多向分化的能力。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、Western blot技术筛选沉默TP53INP2效率高的siRNA序列,构建TP53INP2表达沉默的细胞模型。细胞转染siRNA后成骨诱导3、7天,qRT-PCR检测成骨标记物RUNX2、ALP、OCN、COL1A1的mRNA水平;Western blot检测RUNX2蛋白的表达。利用Western blot实验筛选合适浓度的氯化锂(LiCl)并处理细胞,后通过Western blot实验检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β以及RUNX2、TP53INP2蛋白的表达情况。细胞转染siRNA后成骨诱导3、7天,利用Western blot技术检测自噬相关蛋白LC3、P62等的表达水平。结果:成功分离并培养hASCs,细胞表现出良好的体外增殖及多向分化的能力。细胞经siRNA转染且成骨诱导3、7天后,TP53INP2沉默的hASCs中RUNX2的mRNA水平均明显降低;成骨诱导7天后,RUNX2、ALP、OCN、COL1A1的mRNA水平均明显下降。Western blot结果显示成骨诱导细胞3、7天后,TP53INP2沉默的hASCs中RUNX2的蛋白水平均显著下降。细胞经siRNA转染且成骨诱导3、7天后,TP53INP2沉默的hASCs中β-catenin的蛋白表达下降。LiCl浓度筛选结果显示5mM浓度的LiCl可激活Wnt/β-catenin信号通路,同时促进hASCs成骨分化,表现为RUNX2表达的增加;而高浓度LiCl(≥15mM)抑制hASCs成骨分化。使用含5mM LiCl的成骨诱导液培养hASCs 7天后,因TP53INP2沉默而导致的原本低表达β-catenin和RUNX2蛋白部分恢复。细胞经siRNA转染且成骨诱导3、7天后,LC3总蛋白水平和LC3-II/LC3-I转化率均下降。结论:沉默TP53INP2抑制hASCs成骨分化。5mM浓度LiCl促进hASCs成骨分化,高浓度LiCl(≥15mM)抑制hASCs成骨分化。TP53INP2对hASCs成骨分化的作用可能与激活β-catenin信号通路及自噬调控有关。这为后续研究TP53INP2在hASCs成骨分化中的作用机制奠定了基础,并为TP53INP2靶向修复骨缺损的提供可能。